人大细胞肺癌细胞带荧光素酶 ；NCI-H460/LUC

                                                           人大细胞肺癌细胞带荧光素酶 ；NCI-H460/LUC
产品信息：

NCI-H460/LUC 是一种荧光素酶标记的人大细胞肺癌细胞系，源自NCI-H460细胞（从大细胞肺癌患者胸水中建立），通过稳定转染荧光素酶（Luciferase）基因实现生物发光成像能力。该细胞系常用于肿瘤研究、药物筛选及体内肿瘤模型监测，支持荧光素酶活性检测（需添加D-荧光素底物）。

细胞特性

形态与生长：上皮样细胞，贴壁生长，显微镜下呈铺路石状排列。

分子特征：表达p53 mRNA（水平与正常肺细胞相当），角蛋白和波形蛋白纤维染色阳性，神经丝三联体蛋白阴性；携带TP53突变及RB1缺失，部分细胞高表达c-Myc、Bcl-2等肿瘤标志物。

荧光素酶功能：转导LUC基因后，可在D-荧光素底物存在下发光，适用于活体成像和荧光强度定量（实验需维持嘌呤霉素筛选以稳定荧光强度）。

生长参数：倍增时间约23-60小时，推荐培养温度37℃、5% CO。

培养操作

培养基与环境：推荐使用RPMI-1640培养基（含10%胎牛血清、1% P/S双抗、1% L-谷氨酰胺、1%丙酮酸钠），37℃、5% CO培养箱中维持。

传代步骤：

细胞密度达80%-90%时进行传代（首次传代建议1:2比例）；

弃去培养上清，PBS润洗1-2次，加入0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA消化液（1-2ml/瓶），37℃消化1-2分钟；

显微镜下观察细胞变圆脱落，加入完全培养基终止消化，吹打制成单细胞悬液；

1000 rpm离心5分钟，弃上清后重悬于新培养基，按1:2至1:5比例分瓶（如T25瓶传2-5个新瓶），补加6-8ml培养基继续培养。

冻存与复苏：

冻存：细胞融合度达80%时，消化离心后用无血清冻存液（或90% FBS+10% DMSO）重悬，程序降温后存于液氮或-80℃；

复苏：液氮中取出冻存管，37℃水浴快速解冻，转移至含5-6ml完全培养基的离心管，1000 rpm离心5分钟，弃上清后接种T25瓶，培养过夜。

注意事项

无菌操作：全程需在超净台或生物安全柜中进行，避免污染（运输途中少量细胞脱落属正常现象，可离心回收后重悬传代）。

细胞状态监测：收到细胞后先观察瓶体完整性及培养液状态，静置3-4小时稳定后显微镜检查，并拍照记录前3天细胞形态（售后依据）。

特殊处理：贴壁不牢细胞易脱落，消化时需严格控制时间（避免过度消化损伤细胞）；荧光素酶活性需定期检测（随传代次数增加荧光强度可能减弱）。

质量控制：建议定期做STR鉴定、支原体检测及细胞活力验证（台盼蓝染色法），确保细胞生物学行为稳定。

细胞类型与特性：

原代细胞：直接从组织中分离的细胞，通常指第1-10代细胞，具有接近体内状态的特性。

细胞系：原代细胞首次传代成功后形成的细胞群，可连续传代。

细胞株：从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞，通常为第10-50代。

根据生长方式分为：

贴壁细胞：需附着在培养瓶表面生长，如成纤维细胞、上皮细胞。

悬浮细胞：在培养基中自由悬浮生长，如血液细胞。

半贴壁半悬浮细胞：兼具贴壁和悬浮生长特性。

特殊细胞的生物特性举例：

成纤维细胞：具丰富粗面内质网、高尔基体，能合成胶原纤维、弹性纤维及有机基质；在外伤刺激下可恢复幼稚状态，参与组织修复。

肿瘤细胞：具无限增殖、贴壁依赖或悬浮生长、易转化等特性，常用于药物筛选与癌变机制研究。

神经干细胞：具多向分化潜能（可分化为神经元、星形胶质细胞等），增殖能力强，在体外培养中可形成克隆球。

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注意事项与应用：

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。