产品信息：
A375-EGFP细胞是一种人恶性黑色素瘤细胞系，携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记，广泛用于肿瘤生物学和基因表达研究。以下是关于A375-EGFP细胞的详细说明、培养操作和特性：
产品名称 | 人恶性黑色素瘤细胞+EGFP；A375+EGFP | 英文名称 | EGFPA375+EGFP：EGFPA375EGFP |
货号 | AXB10155 | 生长特性 | 贴壁生长 |
用途 | 仅用于科研 实验 | 种属 | 人 |
细胞特性
来源：A375细胞系源自一位54岁女性患者的皮肤恶性黑色素瘤组织，EGFP标记通过基因工程手段引入，便于荧光显微镜下实时观察细胞行为。
形态：上皮细胞样，贴壁生长，细胞直径约12微米。
生长特性：生长较快，倍增时间约24-32小时，具有较高的致瘤性，在免疫抑制小鼠中可形成黑色素瘤皮下肿瘤。
基因特征：携带BRAF V600E突变，对MEK抑制剂敏感，常用于相关信号通路研究。
2. 培养操作
2.1. 培养基
推荐使用DMEM高糖培养基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素（P/S）溶液
2.2. 培养条件
温度：37°C。
气体环境：95%空气 + 5% CO。
湿度：饱和湿度。
2.3. 传代步骤
观察细胞密度：当细胞融合度达到70%-80%时进行传代。
去除旧培养基：轻轻吸去培养瓶中的旧培养基。
清洗细胞：用预热的PBS轻轻清洗细胞1-2次。
消化细胞：加入适量的0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞消化情况。
终止消化：加入适量含血清的新培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落并均匀悬浮。
分装细胞：将细胞悬液按1:2至1:4的比例分装到新的培养瓶中，加入新鲜培养基。
继续培养：将培养瓶放回培养箱中继续培养。
2.4. 冻存与复苏
冻存：使用含有90%胎牛血清和10%DMSO的冻存液，将细胞悬液分装到冻存管中，按照标准冻存程序逐步降温后存放在液氮罐中。
复苏：从液氮中取出冻存管，迅速放入37°C水浴中摇晃解冻，然后将细胞悬液转移到含有预热培养基的离心管中，离心后弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞，接种到培养瓶中继续培养。
3. 注意事项
细胞状态监控：定期观察细胞形态和生长状态，确保无污染，并根据实验需求调整传代比例和培养条件。
荧光检测：利用荧光显微镜或流式细胞仪检测EGFP表达，监测细胞行为或转染效率。
用途限制：该细胞系仅供科研使用，不得用于临床或动物实验。
培养操作要点：
基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。
培养条件设置：
温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。
pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。
CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。
渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。
功能特点
通过被动运输和主动运输实现物质跨膜转运；以ATP为核心载体，通过线粒体氧化磷酸化或叶绿体光合磷酸化途径供能；通过受体-第二信使-效应器的级联反应模式进行信号转导；原核细胞采用二分裂，真核细胞则通过有丝分裂、减数分裂等方式繁殖；细胞可进行程序性死亡（凋亡），并在多细胞生物中实现分化形成不同组织
注意事项与应用
无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。
营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。
抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。
细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。
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关键字： EGFPA375+EGFP;人恶性黑色素瘤细胞+EGFP;贴壁细胞;
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