6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
磷酸戊糖途径途径中 6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)和 6PGDH 依次催化 NADPH 合成,与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外,6PGDH 逆境生理中具有重要作用。
测定原理:
6PGDH 催化 6-磷酸葡萄糖酸和 NADP+生成 NADPH ,NADPH 在 340 nm 有特征吸收峰,而 NADP+没有;通过测定 340nm 吸光度增加速率,计算 6PGDH 活性。
自备仪器和用品:
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿和蒸馏水。测定操作:
1. 分光光度计预热 30min ,调节波长到 340 nm,蒸馏水调零。
2. 将试剂二和试剂三转移至试剂一中充分溶解;在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
3. 取 1mL 石英比色皿,依次加入 50μL 样本和 950μL 试剂一,于 340nm 处测定 3min 内吸光值变化,第 10 s吸光值记为 A1 ,第 190s 吸光值记为 A2 。△A=A2-A1。
注 意:
正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
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