磷酸转乙酰酶(PTA)活性测定试剂盒微板法/48样
产品简介:
磷酸转乙酰酶(PTA,EC 2.3.1.8)是与乙酸代谢相关的关键酶之一。磷酸转乙酰酶(PTA)催化辅酶 A 和乙酰磷酸反应生成乙酰辅酶 A 和无机磷,通过钼酸铵定磷法测定无机磷的增加量来测定 PTA 酶活性大小。反应式:CoA+acetyl phosphate⇋acetyl-CoA+phosphate试剂盒组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
提取液 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 20mL×1 瓶
临用前甩几下使试剂落入底部,再加 3.2mL蒸馏水溶解备用。
试剂二
粉剂 mg×1 支
用前甩几下使试剂落入底部,再加 1.1mL 蒸馏水,混匀溶解备用。
试剂三
粉体 mg×1 支
-20℃保存
用前甩几下使试剂落入底部,再加 0.55mL蒸馏水,混匀溶解备用。
试剂四
液体 4mL×1 瓶
试剂五
A:粉体 mg×1 瓶
B:液体 2mL×1 瓶
临用前向 A中加 1.8mL的 B液,加23.2mL 的蒸馏水,混匀溶解备用。
标准品
若重新做标曲,则用到该试剂
所需的仪器和用品:酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
磷酸转乙酰酶(PTA)活性测定:建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
样本制备:① 组织样本:
称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 12000rpm 4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。
[注]:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1 :5~10 的比例提取②细胞样本:
先收集细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细胞加入 1mL 提取液;超声波破碎细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);4ºC 约 12,000rpm离心 10min,取上清作为待测样品。
[注]:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。
上海酶联生物科技有限公司
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