6磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脱氢酶测定试剂盒/微量法/96样
测定意义:
G6PDH(EC 1.1.1.49 )广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是磷酸戊糖途径的关键酶,催化 6-磷酸葡萄糖氧化为 6 -磷酸葡萄糖酸内酯,同时将 NADP+还原为 NADPH,供生物合成及维持细胞内的还原状态用。因此 6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。
测定原理:
G6PDH 催化 NADP+还原生成 NADPH ,在 340 nm 下测定 NADPH 增加速率。
自备仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。G6PDH 测定操作表:1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、将试剂二和试剂三转移至试剂一中充分溶解;在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
3、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 试剂一,混匀后立即记录 340nm 处 1min 后吸光值 A1 和 6min 后的吸光值 A2 ,计算 ΔA=A2-A1。
注 意:
若 ΔA 大于 0.5 ,需将酶液用提取液稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数。或将反应时间缩短至 2min ,使A2-A1小于 0.5,可提高检测灵敏度。
上海酶联生物科技有限公司
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