辅酶Ⅰ(NAD+/NADH)含量测定试剂盒/比色法/24样
测定原理:
分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NAD+ 和 NADH ,NADH 通过 PMS 的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲䐶(Formazan),在 570nm 下检测吸光值;而 NAD+ 可被乙醇脱氢酶还原为 NADH,进一步采用 MTT 还原法检测。
实验仪器:
可见分光光度计、台式离心机、移液器、1mL 比色皿、研钵、冰和蒸馏水。检测步骤:
试剂
测定管
对照管
样品 ( μL)
50
试剂一 ( μL)
250
试剂二 ( μL)
75
试剂三 ( μL)
试剂四 ( μL)
试剂五 ( μL)
35
试剂六 ( μL)
500
混匀,室温避光静置 20 min
充分混匀,静置 5 min 后,20000 g ,常温离心 5 min ,弃上清,取沉淀;
试剂七 ( μL)
1000
混匀,波长 570nm 处,1cm 光径比色皿,蒸馏水调零,测定各管吸光值。
上海酶联生物科技有限公司
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