谷氨酰胺酶(GLS)测定试剂盒/微量法/96样
测定意义:
GLS(EC3.5.1.1)是酰胺基水解酶,催化天冬酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代谢中具有重要调控作用,尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
测定原理:
GLS 催化谷氨酰胺水解成 L-谷氨酸和氨,利用奈氏试剂检测氨增加的速率,即可计算其酶活性。
需自备仪器和用品:
台式离心机、酶标仪、96 孔板、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。测定步骤:样品测定(在 EP 中加入下列试剂)
试剂名称(μL)
测定管
对照管
样本
25
蒸馏水
试剂一
100
试剂二
400
混匀,37℃水浴 1 小时
试剂三
525
混匀,8000 g ,25℃离心 10 min;取上清液,在 96 孔板中加入下列试剂
上清液
130
试剂四
30
试剂五
20
试剂六
混匀,室温静置 15min ,420nm 处读取测定管和对照管吸光值,计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。对照管只要做一管。
1、试剂六如出现沉淀,静置后取上清使用。
2、ΔA(A测定管-A对照管)若出现负值,可能是酶活性较低,可将反应时间1h延长到2h ,相应的在计算公式中除以2。
上海酶联生物科技有限公司
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