谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测定试剂盒/比色法100管/48样
测定意义:
谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶。它特异的催化还原型谷胱甘肽(GSH)对过氧化氢的还原反应,可以起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。GSH-PX 的活性中心是硒半胱氨酸,硒是 GSH-PX 的必需部分,每克分子酶含 4 克原子硒。测定 GSH-PX 的活力可以作为衡量机体硒水平的一项生化指标。
测定原理:
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)可以促进过氧化氢(H2O2)与还原型谷胱甘肽(GSH)反应生成 H2O 及氧化型谷胱甘肽(GSSG),谷胱甘肽过氧化物酶的活力可用其酶促反应的速度来表示,测定此酶促反应中还原型谷胱甘肽的消耗,则可求出酶的活力。。
测定步骤:
酶促反应:(试剂一应用液提前在 37ºC 预温)
| 非酶管 | 酶 管 |
1mmol/L GSH(ml) | 0.2 | 0.2 |
待测溶血液(ml) |
| 0.2 |
37ºC 水浴预温 5 分钟 |
试剂一应用液 | 0.1 | 0.1 |
37ºC 水浴准确反应 5 分钟 |
试剂二(ml) | 2 | 2 |
待测溶血液 (ml) | 0.2 |
|
混匀,3500~4000 转/分,离心 10 分钟,取上清 1ml 作显色反应。 |
注 意:
1、溶血液在室温下 1 小时内活力不变,建议样品稀释后不超过 1 小时测试为宜。
2、血样要新鲜,肝素抗凝后放冰箱 4~8℃存放不要超过 48 小时。
3、测溶血液中 GPX 含量要注意样品测试前红细胞一定要充分溶血。(以对光观察透亮为标准,若不透亮可以冻溶一次,但有部分大鼠及猪的红细胞是不可冻溶越冻越不破,最好先取 1~2 只样本做预试)
4、试剂一存放瓶要彻底洗干净,应用液要现用现配。
5 、1mmol/L GSH 、0.1 mmol/L GSH 、20 μmol/L GSH 的标准品,现用现配。
6 、37℃水浴反应时间 5 分钟,记录反应时间要准确。
7、测定上清液当天提取,当天测试。
8、组织蛋白质的测定法有多种,可参考实验方法学部分,或购买本研究所蛋白定量试剂盒。
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