碱性磷酸酶(AKP/ALP)测定试剂盒/分光光度法/24样
测定意义:
AKP/ALP 是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。
测定原理:
在碱性环境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与 4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通过测定 510 nm 吸光度增加速率,来计算 AKP 活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
测定步骤:
1. 分光光度计预热 30min ,调节波长到 510 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂三置于 37℃水浴中预热 30 min。
3. 空白管:取 EP 管,加入 20μL 蒸馏水,200μL 试剂二,200μL 试剂三,混匀后置于 37℃水浴中保温15min;加入试剂四 600μL ,混匀后于 510 nm 测定吸光度,记为 A 空白管。
4. 标准管:取 EP 管,加入 20μL 标准品,200μL 试剂二,200μL 试剂三,混匀后置于 37℃水浴中保温15min;加入试剂四 600μL ,混匀后于 510 nm 测定吸光度,记为 A 标准管。
5. 对照管:取 EP 管,加入 20μL 上清液,200μL 蒸馏水,200μL 试剂三,混匀后置于 37℃水浴中保温15min;加入试剂四 600μL ,混匀后于 510 nm 测定吸光度,记为 A 测定管。
6. 测定管:取 EP 管,加入 20μL 上清液,200μL 试剂二,200μL 试剂三,混匀后置于 37℃水浴中保温15min;加入试剂四 600μL ,混匀后于 510 nm 测定吸光度,记为 A 测定管。
注 意:
空白管和标准管只需测定一次。每个测定管设一个对照管。
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