大鼠胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)elisa试剂盒

1. 检测原理

采用双抗体夹心ELISA技术，特异性识别大鼠GDNF成熟二聚体（15kDa/亚基）。预包被抗大鼠GDNF单抗（靶向N端表位）捕获样本中的GDNF，生物素标记的二抗（识别C端受体结合域）通过链霉亲和素-HRP系统催化超敏化学发光底物，发光强度与GDNF浓度呈正相关。

 2. 核心组分

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  高亲和力单抗（Kd=0.12nM）

重组标准品  0-500pg/mL  -80℃  活性二聚体（比活性≥1×10 U/mg）

脑脊液保护液  10mL  -20℃  含抗氧化剂复合物

组织裂解缓冲液  20mL  4℃  含1% NP-40/蛋白酶抑制剂

神经营养因子鸡尾酒  1mL  -20℃  BDNF/NT-3/NGF混合刺激剂

3. 性能参数

检测范围：15.6-500pg/mL（可扩展至2000pg/mL）

灵敏度：4.7pg/mL（基于3SD空白值）

样本兼容性：

最佳：黑质-纹状体组织匀浆

适用：脑脊液（需去纤维蛋白）、血清（1:3稀释）

交叉反应：

大鼠GDNF：100%

人GDNF：85%

BDNF/NGF/NT-3：<0.01%

精密度：

批内CV：5.1-7.3%

批间CV：8.2-10.5%

4. 样本处理规范

4.1 脑组织处理

快速分离黑质和纹状体（冰上操作）

按1:9（w/v）加入冷裂解液

超声破碎（冰浴，10kHz，3×5秒脉冲）

4℃ 15000×g离心30分钟

4.2 脑脊液采集

小脑延髓池穿刺取100μL

立即加入等体积保护液

10000×g离心20分钟（4℃）

4.3 特殊处理

细胞培养：无血清培养基培养48小时

长期保存：液氮速冻后-80℃存放

5. 实验操作要点

标准曲线制备

梯度稀释：0、15.6、31.2、62.5、125、250、500pg/mL

复溶液：含0.1% BSA的PBS（pH7.4）

关键步骤控制

孵育条件：37℃恒温摇床（180rpm）

洗板程序：自动洗板机（350μL/孔×6次）

信号读取：化学发光仪（积分时间0.5秒/孔）

质控标准

空白RLU值：≤800

最低检测限：≥15pg/mL

黑质组织阳性对照：≥200pg/mg蛋白

6. 主要应用方向

帕金森病研究：多巴胺能神经元保护

脊髓损伤：神经再生能力评估

疼痛模型：GDNF/Ret信号通路分析

基因治疗：AAV-GDNF疗效监测

7. 注意事项

实验设计

推荐采样时间：干预后7-28天

必须设置：假手术对照组

干扰控制

避免使用含血清的培养基样本

溶血样本需超速离心（12000×g，15min）

数据分析

推荐四参数logistic曲线拟合

组织数据需用BCA法校正（pg/mg蛋白）

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