人胰岛素(INS)ELISA试剂盒

概述

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）定量检测人血清、血浆、尿液等样本中胰岛素（INS）的浓度。通过特异性抗体结合、酶催化显色反应，实现高灵敏度和高特异性的检测。

实验原理

包被抗体：微孔板预包被抗人胰岛素单克隆抗体。

样本孵育：加入待测样本，样本中的胰岛素与固相抗体结合。

酶标抗体结合：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。

显色反应：加入底物TMB（四甲基联苯胺），在HRP催化下生成蓝色产物，终止液（酸性溶液）作用后转为黄色。

定量分析：450 nm波长测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算胰岛素浓度。

试剂盒组成

| 组分 | 96孔配置 | 48孔配置 |

| 微孔酶标板 | 8孔×12条 | 8孔×6条 |

| 标准品（mIU/L） | 0.3 mL×6管 | 0.3 mL×6管 |

| 样本稀释液 | 6 mL | 3 mL |

| HRP标记检测抗体 | 10 mL | 5 mL |

| 20×洗涤缓冲液 | 25 mL | 15 mL |

| 底物A/B液 | 各6 mL | 各3 mL |

| 终止液 | 6 mL | 3 mL |

标准品浓度梯度：32、16、8、4、2、1 mIU/L。

样本处理与保存

血清/血浆：采集后3000 rpm离心10分钟，分离上清液，-20℃保存（避免反复冻融）。

其他体液：离心去除颗粒物，分装冻存。

操作步骤

试剂准备：所有组分平衡至室温（20-25℃），20×洗涤液按1:19稀释。

加样：每孔加入50 μL标准品或样本，37℃孵育30分钟。

洗涤：弃液后拍干，每孔加满洗涤液，重复5次。

酶标抗体：每孔加入100 μL HRP标记抗体，37℃孵育30分钟。

显色：加入底物A/B液各50 μL，避光反应15分钟。

终止与检测：加入终止液50 μL，立即测定450 nm OD值。

注意事项

温育控制：严格遵循时间和温度要求，避免微孔干燥。

洗涤操作：彻底洗涤可降低背景干扰，确保吸干孔内液体。

样本稀释：若浓度超出标准曲线上限，需用稀释液调整。

试剂保存：未使用组分需2-8℃冷藏，避免反复冻融标准品。

技术参数

检测范围：1–32 mIU/L（可扩展至64 mIU/L）。

灵敏度：<0.5 mIU/L。

特异性：与人胰岛素原交叉反应率<0.1%。

有效期与存储

未开封试剂盒：2-8℃保存，有效期12个月。

开封后：酶标板需密封防潮，HRP试剂4℃保存1个月。

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