马链球菌（S. equi）检测试剂盒（荧光PCR法）
一、 产品概述
马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equi subsp. equi，简称S. equi）是引起马属动物（马、驴、骡）高度接触性传染病——“马腺疫”的主要病原体。该病以发热、上呼吸道黏膜发炎、颌下淋巴结化脓性肿胀为特征，传染性强，对马匹健康和马业经济造成重大影响。
产品名称 | 马链球菌（S. equi）检测试剂盒（荧光PCR法） | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1162 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
本试剂盒采用荧光聚合酶链式反应（实时荧光PCR）技术，针对马链球菌的特异性基因片段进行扩增和检测。该方法具有灵敏度高、特异性强、速度快、自动化程度高等特点，能够快速、准确地从鼻拭子、咽拭子、脓肿脓液或淋巴结穿刺液等样本中检测出马链球菌的核酸，为马腺疫的早期诊断、隔离和净化提供可靠的实验室依据。
二、 检测原理
核酸提取：首先从处理的样本中提取出总核酸（包括DNA和RNA，马链球菌为DNA病毒，但试剂盒通常包含DNA提取步骤）。
PCR扩增：将提取的核酸与试剂盒内的反应液混合。反应液中包含：
特异性引物：设计与马链球菌独有基因高度保守区域互补的短链核苷酸，能特异性地结合到目标DNA上。
荧光探针：一条带有报告荧光基团（如FAM） 和淬灭荧光基团 的短链核苷酸。当探针完整时，淬灭基团会抑制报告基团发光。在PCR扩增过程中，Taq酶具有5‘→3’外切酶活性，会降解与模板结合的探针，使报告基团游离出来并发出荧光。
实时检测：实时荧光PCR仪在每一次循环的退火/延伸步骤结束时，检测反应管中的荧光信号强度。每扩增一次，目标DNA片段的数量就增加一倍，释放的荧光信号也相应增强。
Ct值判定：仪器软件会记录每个反应管的荧光信号达到预设阈值时所经历的循环数，即Ct值。样本中病原体核酸的起始浓度越高，Ct值就越小；反之，浓度越低，Ct值就越大。
三、 试剂盒组成（以典型试剂盒为例）
PCR反应液：含有dNTPs、缓冲液、Mg2?等，是PCR反应的基础。
酶混合物：包含热启动Taq DNA聚合酶等。
马链球菌阳性对照：含有已知浓度的马链球菌特异性基因片段，用于验证整个实验过程是否成功。
阴性对照：不含马链球菌核酸的溶液，用于监测是否存在污染。
无核酸酶水：用于稀释或作为空白对照。
注意：核酸提取试剂可能需要单独购买，或部分试剂盒会配套提供。
操作步骤（简要流程）
警告： 操作需在专门的分子生物学实验室进行，严格分区（试剂准备区、样本处理区、扩增及产物分析区），并遵守防污染规程。
样本采集与处理：
样本类型：鼻拭子、咽拭子、脓肿脓液、淋巴结穿刺液等。
处理：将拭子头浸入适量的生理盐水或PBS中，震荡洗脱；脓液等液体样本可直接或稀释后使用。
核酸提取：
按照商业化的核酸提取试剂盒（如柱式法或磁珠法）说明书，从处理好的样本中提取DNA。建议使用阳性和阴性对照同步进行提取。
PCR反应体系配制：
在试剂准备区，根据待检测样本数量（包括阴阳性对照），计算并配制主反应混合液（将PCR反应液、酶混合物等按比例混合）。
将适量主反应混合液分装至PCR反应管或反应板中。
加样：
将提取的样本DNA、阳性对照、阴性对照分别加入对应的反应管中，盖紧管盖。
上机扩增：
将反应管放入实时荧光PCR仪，设置好反应程序（通常为：预变性95℃ 2-5分钟；然后进行40-45个循环，每个循环包括95℃变性15秒，60℃退火/延伸30-60秒，在此阶段采集荧光信号）。
结果分析：
运行结束后，由仪器软件自动分析荧光曲线和Ct值。
五、 结果解读
这是最关键的一步，必须严格按照试剂盒说明书进行。
阳性对照：必须有典型的S型扩增曲线，且Ct值落在说明书规定的范围内。
阴性对照：必须无扩增曲线或Ct值为无解（Undetermined）。
有效性判定：只有阴阳性对照结果符合上述要求，本次检测才有效。
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