流行性乙型脑炎病毒 / 新布尼亚病毒检测试剂盒( 双重荧光 PCR 法 )
一、 产品概述：
流行性乙型脑炎病毒（Japanese Encephalitis Virus, JEV） 和 新布尼亚病毒（Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome Virus, SFTSV） 是两种通过媒介传播的重要病原体。
JEV：由蚊子传播，引起流行性乙型脑炎（乙脑），是一种严重的急性神经系统感染性疾病，可导致高热、意识障碍、抽搐甚至死亡或神经系统后遗症。
SFTSV：主要由蜱虫传播，引起发热伴血小板减少综合征（SFTS），临床以发热、血小板减少、白细胞减少和多器官功能损害为主要特征，病死率高。
尽管传播媒介不同（蚊 vs. 蜱），但两者在感染早期均可表现为急性发热，且都可能影响中枢神经系统，给临床鉴别诊断带来困难。
本试剂盒采用双重实时荧光逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术，用于定性检测人血清、血浆、脑脊液或蜱虫组织等样本中的JEV和SFTSV核酸。其核心价值在于：
快速鉴别诊断：在同一个反应管内快速区分两种病原体感染，为精准治疗和流行病学调查赢得时间。
高灵敏度与特异性：实现早期诊断，尤其在病毒血症期，远早于抗体产生的时间。
高效经济：一管双检，节省样本、时间和试剂成本。
产品名称 | 流行性乙型脑炎病毒 / 新布尼亚病毒检测试剂盒( 双重荧光 PCR 法 ) | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1202 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
二、 检测原理
JEV和SFTSV的遗传物质均为单股正链RNA，因此检测流程始于逆转录（RT）。
核酸提取：从处理的样本中提取总病毒RNA。
逆转录与双重荧光PCR扩增：
逆转录：反应第一步，逆转录酶将病毒RNA模板逆转录为cDNA。
特异性引物与探针：试剂盒包含两套独立的检测系统：
JEV检测系统：针对JEV基因组高度保守区域（如E、PrM或NS1基因）设计特异性引物和一条荧光探针。该探针通常标记有报告基团（如FAM），发射绿色荧光。
SFTSV检测系统：针对SFTSV基因组高度保守区域（如S片段）设计特异性引物和另一条荧光探针。该探针通常标记有另一种报告基团（如VIC/HEX），发射不同于FAM的荧光（如黄色）。
实时检测与区分：在PCR扩增过程中，两套系统在同一反应管内并行工作。实时荧光PCR仪在每轮循环的退火/延伸结束时，在两个独立的荧光通道（如FAM通道和VIC通道） 分别采集信号。
样本含JEV核酸 → FAM通道荧光信号增长。
样本含SFTSV核酸 → VIC通道荧光信号增长。
样本同时含有两种病毒（极为罕见）→ 两个通道信号均增长。
Ct值判定：各通道荧光信号突破预设阈值的循环数（Ct值）与病毒核酸的起始浓度成反比。
三、 试剂盒组成（以典型试剂盒为例）
PCR反应液：包含缓冲液、dNTPs等。
酶混合物：包含热启动Taq DNA聚合酶和逆转录酶的预混酶。
JEV阳性对照：含有灭活的JEV核酸片段或人工构建的质粒。
SFTSV阳性对照：含有灭活的SFTSV核酸片段或人工构建的质粒。
阴性对照：无核酸酶水。
内标（Internal Control, IC）：高级试剂盒会包含，用于监控从核酸提取到扩增的全过程，防止假阴性。内标通常使用第三个荧光通道（如ROX/CY5）。
四、 操作步骤（简要流程）
前提： 在生物安全二级（BSL-2）实验室操作，处理人源样本需遵循相应生物安全规程。严格分区以防污染。
样本采集与处理：无菌采集患者急性期血清、血浆或脑脊液。蜱虫样本需匀浆处理。
核酸提取：使用商业化病毒RNA提取试剂盒提取总RNA。若试剂盒含内标，应在提取前加入。
反应体系配制：在试剂准备区，将PCR反应液、酶混合物等配制为主反应混合液。
加样：将主反应混合液分装至PCR管，然后分别加入提取的样本RNA、阳性对照和阴性对照。
上机扩增：将反应管放入实时荧光PCR仪，设置双重检测程序。典型程序：
逆转录：50℃ 15-30分钟。
预变性：95℃ 2-5分钟。
PCR循环（40-45个循环）：95℃ 10-15秒（变性），55-60℃ 30-60秒（退火/延伸，在此阶段同时采集FAM和VIC通道的荧光信号）。
结果分析：仪器软件自动分析各通道的扩增曲线和Ct值。
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