实验方案示例
钙离子标准曲线建立实验方案
钙离子标准曲线可通过测量指示剂盐形式（荧光酶标仪中使用25-50 µM浓度）在已知游离钙离子浓度溶液中的荧光强度来建立。建议采用基于30 mM MOPS EGTA钙离子缓冲体系的校准溶液。由于水中通常含有痕量钙离子，强烈推荐使用30 mM MOPS + 100 mM KCl (pH 7.2)作为缓冲体系。可按以下方法配制0 µM和39 µM钙离子储备液，用于制备不同钙离子浓度的梯度溶液：
A液（0 µM钙离子）：
30 mM MOPS + 100 mM KCl (pH 7.2)缓冲液 + 10 mM EGTA
B液（39 µM钙离子）：
30 mM MOPS + 100 mM KCl (pH 7.2)缓冲液 + 10 mM EGTA + 10 mM CaCl2
测定溶液游离钙离子浓度或单波长钙离子指示剂的Kd值时，需使用以下方程：
[Ca]Free = Kd [F - Fmin] / [Fmax - F]
其中：
F - 特定钙离子浓度下的荧光强度
Fmin - 无钙条件下的荧光强度
Fmax - 钙饱和状态下的荧光强度
解离常数(Kd)反映探针对钙离子的亲和力。
注意：荧光指示剂的钙结合特性和光谱特性在细胞环境与校准溶液中存在显著差异。细胞内指示剂的原位校准通常获得的Kd值明显高于体外测定值。
原位校准方法：
离子载体法：将负载指示剂的细胞暴露于含有A-23187、4-溴代A-23187或离子霉素等钙离子载体的可控钙离子缓冲液中
细胞透化法：使用洋地黄皂苷或Triton® X-100等透化剂使指示剂接触细胞外介质中的可控钙离子水平
荧光检测参数设置为：激发波长750nm/发射波长790 nm
注：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
关键字： AAT Bioquest;钙离子探针;Cal770, 钾盐;
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