Caco-2人直肠癌细胞

                                                           Caco-2人直肠癌细胞
产品信息：

Caco-2细胞是一种广泛用于研究肠道吸收、转运及肠上皮屏障功能的人结直肠腺癌细胞系。

细胞特性：

来源：Caco-2细胞系于1977年从一名72岁男性结直肠腺癌患者的直肠原位癌组织中分离建立。

形态：细胞呈上皮样，贴壁生长，自发分化为肠上皮样细胞，形成具有微绒毛和紧密连接的单层结构。

生长特性：细胞生长缓慢，倍增时间约为3-4天，传代周期较长，通常每5-7天传代一次。

分子特征：表达肠上皮细胞相关标志物，如碱性磷酸酶、乳糖酶、视黄醇结合蛋白等，具有药物转运体和代谢酶活性，可模拟小肠上皮细胞的吸收和代谢功能

培养条件：

培养基：通常使用MEM或DMEM培养基，补充20%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（P/S）。

培养环境：37℃、5% CO₂培养箱，湿度保持在70%-80%。

传代比例：1:2至1:4，当细胞密度达到80%-90%时进行传代。

培养操作步骤：

复苏：

从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻。

将细胞悬液转移至含有预热培养基的离心管中，1000 rpm离心5分钟，弃去上清。

加入新鲜培养基重悬细胞，转移至培养瓶中，37℃培养箱中培养48小时，避免频繁观察或晃动培养皿。

传代：

弃去旧培养基，用PBS轻轻润洗细胞1-2次。

加入胰蛋白酶-EDTA溶液消化细胞，消化时间较长（5-10分钟），显微镜下观察细胞成片脱落时，加入完全培养基终止消化。

轻轻吹打细胞，使其成小团块，离心收集细胞，用新鲜培养基重悬后按适当比例分至新的培养瓶中。

冻存：

收集对数生长期细胞，用冻存液（含10%DMSO的完全培养基）重悬细胞。

分装至冻存管中，按照标准冻存程序（如程序降温盒或逐步降温法）降至液氮温度后长期保存。

注意事项：

Caco-2细胞贴壁较慢，复苏或传代后需等待48小时以上才能完成贴壁，建议第三天再进行换液操作。

细胞消化困难，细胞间连接紧密，消化时需耐心观察，避免过度消化。

维持血清浓度在20%有助于细胞贴壁和生长。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。

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注意事项与应用：

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。