总脂酶[脂蛋白脂酶(LPL)肝脂酶(HL)]测定试剂盒/比色法50管/24样
测定意义:
脂蛋白脂酶(Lipoprotein Lipase LPL)存在肝外组织毛细血管内皮细胞表面,它主要催化血浆中乳糜微粒(CM)和极低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三酯(TG)水解,在乳糜微粒(CM)及极低密度脂蛋白(VLDL)的降解中发挥重要作用。肝脂酶(Hepatic Lipase HL)则仅存在肝内皮细胞表面,它主要在中密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)代谢中起重要作用。测试原理:
脂蛋白脂酶(LPL) 和肝脂酶(HL) 可分解甘油三酯(TG) 并水解为甘油及游离脂肪酸(FFA),用铜试剂测定生成的游离脂肪酸(FFA)的量即可分别计算脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)的活性。肝脂酶为糖蛋白,其活性不需要载脂蛋白(apolipoprotin)CⅡ激活及一些离子的激活,不受高浓度盐及鱼精蛋白的抑制,利用此特点即可分别计算脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)的活性。
样本前处理:
①、称取组织的重量,按重量(g):体积(ml)=1:9的比例,加入 9 倍体积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,制成 10%组织匀浆,2500 转/分,离心 10 分钟,取上清液待测
②、血清(浆)样本直接取样进行测定。操作表:
组份
50 管/24 样
100 管/48 样
保存
试剂一
粉剂
粉剂×2 支
粉剂×4 支
4℃保存 3 个月
溶剂
5ml×1 瓶
10ml×1 瓶
试剂一的配制:用时每支粉剂加溶剂 1.5ml,充分混匀,4℃冰箱保存。
试剂二
溶液
6ml×1 瓶
6ml×2 瓶
试剂三
试剂四
甲液
0.5ml×1 支
乙液
30ml×1 瓶
60ml×1 瓶
试剂四底物应用液的配制:按甲液 ∶ 乙液=1∶200的比例进行配制,需多少配多少。配好后37℃水浴预温 10 分钟以上。
试剂五
4ml×1 瓶
4ml×2 瓶
丙液
30ml×2 瓶
铜试剂配制:按甲液 ∶ 乙液 ∶丙液=2∶1∶17 的比例进行配制,配好的铜试剂为澄清液体,需多少配多少(用不完的不可以和新配的铜试剂混合,否则会对结果有影响。),用之前 37℃ 水
混匀,静置 5 分钟,550nm 处,0.5cm 光径,试剂六调零[注 7] ,将脂蛋白脂酶和肝脂酶管平行比色,测各管吸光度。
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