游离脂肪酸含量(FFA)测定试剂盒/微量法测血清/动物组织/微生物/细胞/96样
测定意义:
游离脂肪酸,也称为非酯化脂肪酸,在与白蛋白结合的血浆中循环。动物血液中的游离脂肪酸 (FFA )含量是一项重要的生理生化指标。血清中游离脂肪酸的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关,游离脂肪酸的浓度会因为糖尿病、重症肝障碍、甲状腺功能亢进等疾病而上升。
测定原理:
用有机溶剂萃取 FFA 。含有 FFA 的有机液与三乙醇胺铜反应,在有机相中形成脂肪酸铜 (铜皂) FFA 一 Cu。 Cu 离子与显色液反应形成紫红色络合物。反应形成的颜色深浅与 Cu 离子浓度的关系符合朗伯一比尔定律,因此可利用此反应进行比色。
自备仪器和用品:
酶标仪、离心机、可调式移液器、96 孔板、蒸馏水。
测定操作:
1 、酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 550 nm。
2 、工作液的配制: 临用前根据用量按照试剂一(V) :试剂二(V) :试剂三( m )=1(mL) :1(mL):0.66(g)的比例充分混匀。(注意:现用现配,用多少配多少,在空瓶中配制,试剂盒中带有 4 个空瓶,先将试剂一与试剂二混合,最后再加入试剂三粉剂)。
3、测定管:吸取600μL样本,加入200μL工作液,盖紧后震荡20min ,4℃, 5000 rpm离心5min,分层后取200μL上层有机相,加入100μL试剂四,摇匀,10 min后测定550 nm的吸光值,记为A测定。
4 、空白管:吸取600μL萃取液,加入200μL工作液,盖紧后震荡20min ,4℃, 5000 rpm离心5min,分层后取200μL上层有机相,加入100μL试剂四,摇匀,10 min后测定550 nm的吸光值,记为A空白。空白管只需测一次。△A=A测定-A空白。
注 意:
1、有机溶剂易挥发,加入96孔板后应尽快检测。
2、测定管中加入的样本即样本前处理中的有机相待测液。
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