线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶(mt-GPD)活性试剂盒分光法/48样
产品简介：
线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶(mt-GPD) 存在于线粒体中，在3-磷酸甘油途径中起重要作用， 催化底物3-磷酸甘油生成磷酸二羟丙酮，同时生成的电子和氢进入呼吸链参与氧化磷酸化； 在电子传递体 (PMS) 存在下，使噻唑蓝 (MTT) 还原生成蓝色产物，通过检测该蓝色产 物在550nm 处的增加速率，即可得出 mt-GPD 活性大小。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 液体60mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂二 | 液体15mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂三 | 液体0.5mL×1支 | 4℃保存 |
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试剂一 | 粉剂mg×2支 | 4℃保存 | 用前甩几下使试剂落入底部，每支加1.2mL的蒸馏水溶解。一周内用完。 |
试剂二 | 粉剂mg×4支 | -20℃保存 | 用前甩几下使试剂落入底部，每支加0.6mL的蒸馏水溶解。一天内用完。 |
试剂三 | 液体35mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂四 | 粉剂mg×1支 | 4℃保存 | 用前甩几下使试剂落入底部，临用前加4.4mL蒸馏水溶解。 |
所需的仪器和用品：
可见分光光度计、石英比色皿(光径1cm)、可调试移液器、台式离心机、水浴锅、研钵、冰和蒸馏水。
线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶(mtGPD)酶活性检测:
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
样本制备：
(提示：整个线粒体的提取过程须保持4℃低温环境):
①称取约0 . 1g 组织或收集500万细菌/细胞，加入1mL 试剂一，用冰浴匀浆器或研钵匀浆，转移至离心管后于4℃×700g离心10min。
②弃沉淀，上清液移至另一离心管中，4℃×12000g 离 心 1 0min。用移液器移除上清液(上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的酶活性(此步可选做)),留下沉淀(沉淀
即为线粒体)。
③在沉淀(线粒体)中加入200μL试剂二和2 μL 试剂三，超声波破碎(冰浴，功率20%或200W, 超声3s, 间10秒，重复30次),液体置于冰上用于线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶
(mtGPD)活性测定。
[注]: 若增加样本量，可按照组织质量 (g): 提取液体积(mL) 为1:5~10的比例进行提取，或按照细菌/细胞数量(104):提取液 (mL) 为500~1000:1 的比例进行提取。行提取)。
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