磷酸葡萄糖变位酶(PGM)试剂盒分光法/48样
产品简介:
磷酸葡萄糖变位酶(PGM)在碳水化合物代谢中起关键作用,并广泛存在于所有生物体中。PGM 可使葡萄糖-1-磷酸(G1P)和葡萄糖-6-磷酸(G6P)互变。当糖原分解时,PGM将 G1P 转化为 G6P,接着进入糖酵解途径产生 ATP,也可通过戊糖磷酸途径产生核糖和NADPH。相反,当细胞需要能量时 PGM 将 G6P 转化为 G1P,进而产生糖原。PGM 的缺乏可导致与葡萄糖存储相关的疾病。本试剂盒提供一种简单,灵敏,快速的测定方法:PGM 将葡萄糖-1-磷酸转化为葡萄糖-6-磷酸;葡萄糖-6-磷酸通过葡萄糖-6-磷酸脱氢酶氧化形成 NADPH,接着与特异显色剂反应生成有色物质,通过检测该有色物在 450nm 的增加速率,进而计算出 PGM 酶活性大小。试剂盒组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
临用前甩几下使粉剂落入底部,再加1.1mL蒸馏水充分溶解备用。
试剂二
临用前甩几下使粉剂落入底部,再加 1.1mL蒸馏水充分溶解备用。
试剂三
液体 2mL×1 支
试剂四
液体 32mL×1 瓶
试剂五
临用前甩几下使粉剂落入底部,再加2.4mL蒸馏水充分溶解备用。
标准品
若重新做标曲,则用到该试剂。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、台式离心机、可调式移液枪。
磷酸葡萄糖变位酶(PGM)活性测定:建议正式实验前选取2个样本做预测定,了解本批样本情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!样本制备:① 组织样本:
称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 12000rpm 4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。
[注]:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1 :5~10 的比例提取
② 细胞样本:
先收集细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细胞加入 1mL 提取液;超声波破碎细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s ,间隔 10s,重复 30 次);4oC 约 12,000rpm离心 10min,取上清作为待测样品。
[注] :若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10?): 提取液(mL)为 500~1000: 1 的比例进行提取。
上海酶联生物科技有限公司
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