支链氨基酸转氨酶(BCAT)活性测定试剂盒微板法/48样
产品简介:
支链氨基酸转氨酶(BCAT,E.C.2.6.1.42) 属于以磷酸吡哆醛作为辅酶的IV类转氨酶。该酶分 布十分广泛,已经发现广泛存在于原核生物和大多数真核生物中。
支链氨基酸转氨酶(BCAT催化特异 L-型氨基酸氨基转移到α-酮戊二酸,形成相应的支链α- 酮酸和谷氨酸;再用特异作用于谷氨酸的酶复合体分解谷氨酸,同时与显色剂反应生成黄色 物质,该物质在450nm 处有大吸收峰,进而得到支链氨基酸转氨酶(BCAT) 的酶活性大小。 该酶催化反应:L-leucine+2-oxoglutarate=4-methyl-2-oxopentanoate+L-glutamate。
试剂盒组成和配制:
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体60mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂一 | 粉 剂 m g × 1 支 | 4°℃保存 | 用前甩几下或4℃离心使试剂落入试管底部,再加2.2mL的蒸馏水充分溶解,仍4℃保存。 |
试剂二 | 粉剂mg×1支 | 4℃保存 | 用前甩几下或4℃离心使试剂落入试管底部,再加1.2mL蒸馏水溶解备用。仍4℃保存。 |
试剂三 | 粉剂mg×1支 | 4°℃保存 | 用前甩几下或4℃离心使试剂落入试管底部,再加1.1mL蒸馏水溶解备用。仍4℃保存。 |
试剂四 | 液体20mL×1瓶 | 4°℃保存 |
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试剂五 | 液体2mL×1支 | 4°℃保存 |
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试剂六 | 粉剂mg×1支 | -20℃保存 | 用前甩几下或4℃离心使试剂落入试管底部,再加1.1mL蒸馏水溶解备用。仍-20℃保存。 |
试剂七 | 液体1mL×1支 | 4℃保存 |
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标准品 | 液体mL×1支 | 4°℃保存 |
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所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
支链氨基酸转氨酶(BCAT)酶活性检测:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
样本制备:
① 组织样本:
称取约0. 1g 组织(水分多的样本取0.5g), 加 入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm, 4℃离心10min, 取上清,置冰上待测。
[注]: 若增加样本量,可按照组织质量(g): 提取液体积(mL)为1:5~10的比例提取。
②细菌/细胞样本:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取500万细菌或细胞加入1mL 提取液;超声波破碎细菌或细胞(冰浴,300W, 超 声 3s, 间 隔 7s, 总 时 间 3min);12000rpm, 4℃离心10min, 取上清,置冰上待测。
[注]: 若增加样本量,按照细菌/细胞数量(104个):提取液体积(mL) 为500~1000:1 的比 例进行提取。
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