产品信息：
产品名称 | SK-BR-3-EGFP-LUC;人乳腺癌细胞绿色荧光蛋白-荧光素酶标记 | 英文名称 | SK-BR-3-EGFP-LUC：SKBR3EGFPLUC |
货号 | AXB10521 | 生长特性 | 贴壁生长 |
用途 | 仅用于科研 实验 | 种属 | 人 |
来源与背景
SK-BR-3-EGFP-LUC由人乳腺腺癌细胞SK-BR-3通过慢病毒转染标记EGFP（增强绿色荧光蛋白）和LUC（荧光素酶）构建而成。该细胞保留了SK-BR-3的生物学特性，同时具备双标记功能，适用于活体成像及基因表达追踪。
形态与生长
形态：上皮细胞样，多边形铺路石状，部分圆形细胞混合。
生长特性：贴壁生长，增殖较慢（倍增时间约4-7天），易出现漂浮细胞。
标记特性
EGFP：在488nm激发光下发出绿色荧光，用于实时定位细胞亚结构及动态观测。
LUC：通过荧光素酶活性检测（需添加底物D-luciferin）实现活体动物成像定量。
培养操作指南
培养条件
基础培养基 RPMI-1640 或 McCoy's 5A
血清添加 10%胎牛血清（FBS）
特殊添加剂 0.5-1.0 μg/mL 嘌呤霉素（Puro）
培养环境 37℃、5% CO?、95%空气
传代比例 1:2至1:3（汇合度80%-90%时传代）
冻存条件 90%完全培养基 + 10% DMSO，液氮保存
操作步骤
复苏
37℃水浴快速解冻冻存管，转移至含5-6 mL完全培养基的离心管，1000 rpm离心5 min。
弃上清，细胞沉淀用完全培养基重悬，接种至预先用明胶包被的T25瓶，培养箱静置2-4小时后观察。
传代
PBS清洗贴壁细胞，加入1 mL 0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化1-3分钟。
显微镜下观察细胞变圆脱落，加入完全培养基终止消化，离心（1000 rpm，5 min）后重悬分瓶。
冻存
对数期细胞离心后，用冻存液重悬（密度≥1×10? cells/mL），程序降温至-80℃后转入液氮。
三、关键注意事项
贴壁与漂浮细胞处理
传代后48小时内勿扰动细胞，促进贴壁。
漂浮细胞需离心收集（1000 rpm，5 min），台盼蓝染色检测活性：活细胞放回原瓶，死细胞清除。
标记稳定性维护
嘌呤霉素需持续添加维持筛选压力（推荐0.5 μg/mL）。
定期通过荧光显微镜和流式细胞术检测EGFP表达强度（阳性率＞95%）。
污染防控
收到细胞后立即用75%酒精消毒管壁，检查荧光背景及污染情况。
若细胞密度低或贴壁异常，需用台盼蓝染色检测活力。
四、应用场景与局限性
研究用途：
活体成像：通过LUC标记实现小鼠模型中肿瘤生长与转移的实时监测。
药物筛选：EGFP标记用于高通量筛选HER2靶向药物（如曲妥珠单抗）。
细胞互作研究：FRET技术结合EGFP/EBFP2双标记，解析活细胞分子互作。
局限性：
生长缓慢且贴壁不牢，需优化培养条件（如添加明胶包被）。
仅限科研使用，不可用于临床或食品开发。
公司正在出售的产品：
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PCDHB6 英文名称： 原钙粘附蛋白β6抗体 0.1ml | CD62L (ELAM-1/L-Selectin ) L选择素抗原 0.5mg |
关键字： SK-BR-3-EGFP-LUC;人乳腺癌细胞绿色荧光蛋白-荧光素酶标记;贴壁细胞;
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