磺胺类药物(十五合一)检测试剂盒
【测定原理】
磺胺类药物(十五合一)检测试剂盒 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的残留物将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光值与其所含残留物类药物的含量成负相关,与标准曲线比较可得出相应残留物类药物的含量。
【试剂盒技术指标】
规 格:96孔敏 度: 0.1ppb
/盒
灵 检测时间:45min
样本检测下限:
组织样本(鸡、鸭、猪肉/肝、虾、鱼、鸡蛋):
牛奶、蜂蜜样本:
样本回收率:
组 织 …………………………………… 85%±20%
牛奶、蜂蜜 ……………………………… 80%±20%
【试剂盒组成】
1、 微量测试孔:1×96孔板(12条×8孔)
2、 标准品溶液×6瓶:(1ml/瓶)0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
3、 高浓度标准品:×1瓶:(1ml/瓶)100ppb
4、 酶标记物 7ml………………………红色帽
5、 抗体工作液 7ml ………………………绿色帽
6、 底物A液 7ml ………………………棕色帽
7、 底物B液 7ml ……………………黑色帽
8、 终 止 液 7ml ……………………黄色帽
9、 20X浓缩洗涤液40 ml ………………白色帽
10、 2X 浓缩复溶液 50ml ·………………蓝色帽
【 所用仪器、试剂】
具备的仪器:酶标仪、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮 吹仪、刻度移液管
微量移液器:单道 20μl~200μl、单道100μl~1000μl多道 30~300 μl
试 剂: 甲醇、正己烷、Na2HPO4·12H2O、NaCl、NaH2PO4·2H2O


【实验前溶液配制】
配液1、20mM PBS缓冲液
5.16g Na2HPO4*12H2O;0.87gNaH2PO4*2H2O;8.5gNaCl;
加入蒸馏水至1000ml;用于样品提取液的配制。
配液2、样品提取液的配制
取1ml甲醇与9ml的20mM PBS缓冲液混匀。
配液3、 将2X浓缩复溶液用去离子水按1:1稀释。(1份浓缩复溶掖+1份去离子水,用于抗体的稀释和样本提取后的复溶)。
配液4、将40ml浓缩洗涤液(20倍浓缩)用去离子水按照 1:19稀
释(1份浓缩洗涤液+19份去离子水),或按 所需用量配制洗涤液
【样本前处理步骤】
u 样本处理前须知
(a)实验中必须使用一次性吸头,吸取不同试剂时要更换吸头。
(b)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。
u 样本处理:
(a)组织样本前处理方法(不用过柱)
1、 称取1±0.05g 均质后的样本于离心管中,加入4ml样品提取
液,振荡5min,室温4000r/min 以上,离心10min;
2、 取1ml上清液收集于另一试管中;加入1ml 正己烷,振荡1min,
室温4000r/min 以上,离心10min;
3、 取50 µl下层液体于另一容器中,加入200μl稀释液混合30s;
4、 取50 μl 用于分析
样本稀释倍数: 20 倍
(b)蜂蜜处理方法
1、 准确称取1±0.05g 蜂蜜样本于离心管中,加入4ml 样品提 取
液,强烈混合振荡5min,室温 4000r/min以上,离心10min;
2、 取出50μl 上清液于另一试管中,加入450μl稀释混合30s;
3、 取50 μl 用于分析
样本稀释倍数: 40 倍
(c)牛奶样品处理方法
脱脂牛奶
1、取出50μl 脱脂牛奶与1950μl稀释液,混30s;
2、取50 μl 用于分析
脂肪奶
3、吸取1ml 牛奶样本于离心管中;于15℃环境3000r/min,离心
10min;(如果没有冷冻离心机请预先冷却后再离心)
4、取出50μl 牛奶于与1950μl稀释液,混合30s;
5、取50 μl 用于分析
样本稀释倍数: 40 倍
【 酶标免疫分析程序】
u 操作步骤:
1、 将所需试剂从冷藏环境中取出,置室温(20-25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、 按板架及需要取出微孔条,将不用的微孔放入自封袋,保存于2-8℃。
3、 编号:将样本和标准品对应微孔按序编号每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
4、 加标准品/样本50µl /孔,然后加酶标记物50μl/孔,再加入抗体工作液50µl/孔。轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板,25℃环境反应30min。
5、 取出用洗涤液按每孔250μl洗板4-5次,每次浸泡15-30秒,拍干(拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)。
6、 显色:每孔加入底物液A液50µl再加B液50µl,轻轻振荡混匀,25℃环境避光显色15min。
7、 测定:每孔加入终止液50µl,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测在5min内读完数据),测定吸光度值(OD值)。
【结果判定】
结果判定有两种方法,粗略判定可用第1种方法,定量判定用第2种方法 产品只用于科研。
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