商品属性：
产品名称 | 传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)检测试剂盒(荧光PCR法) | 检测方法 | 荧光PCR法 |
货号 | XG-P1515 | 应用范围 | 核酸的定性检测 |
规格 | 50T | 用途 | 仅供科研研究实验 |
该试剂盒主要用于水产养殖领域，专门用于检测鲑科鱼类（如鲑鱼、 trout 等）是否感染了传染性胰脏坏死病病毒。IPNV 是一种双RNA病毒，可导致鱼苗和幼鱼出现高死亡率，因此该检测对于疫病防控至关重要。
1. 检测原理
该试剂盒基于 TaqMan 荧光探针法（Real-time RT-PCR）。
逆转录（RT）： 由于 IPNV 是 RNA 病毒，试剂盒首先利用逆转录酶将样本中的病毒 RNA 逆转录成 cDNA。
特异性扩增： 针对 IPNV 病毒的双RNA病毒衣壳蛋白基因或聚合酶基因的高度保守区域设计特异性引物和探针。
荧光检测： 在 PCR 扩增过程中，随着目的基因片段的扩增，荧光探针被切断，释放出荧光信号。仪器实时监测荧光信号的变化，通过扩增曲线和 Ct 值（循环阈值） 来判断样本中是否含有 IPNV。
2. 检测目标与应用
目标病原： 传染性胰脏坏死病病毒（Infectious Pancreatic Necrosis Virus, IPNV）。
应用领域：
水产疫病诊断： 用于疑似感染 IPNV 的病鱼检测。
种苗检疫： 用于鱼卵、鱼苗的垂直传播检测。
环境监测： 监测养殖水体或设施是否被病毒污染。
样本类型： 病鱼的胰脏、肾脏、脾脏等组织匀浆液，或细胞培养上清液。
3. 试剂盒组成（典型配置）
根据主流品牌的配置，试剂盒通常包含以下组分：
组分名称 规格/含量 作用
RT-PCR 反应液 500 μL / 1 mL x 1管 含 dNTPs、缓冲液、Mg2等
酶混合液 (Enzyme Mix) 50 μL - 100 μL x 1管 含逆转录酶、热启动 Taq 酶
阳性对照 (Positive Control) 50 μL x 1管 含 IPNV 靶基因的质粒或灭活病毒
阴性对照 (Negative Control) 50 μL x 1管 无菌双蒸水
说明书 1 份 操作指南和参数说明
注：部分试剂盒可能包含 ROX 参比染料，具体视仪器型号而定。
4. 操作流程简述
样本处理： 采集病鱼组织（如胰脏），加入生理盐水进行研磨匀浆，离心后取上清液。
RNA 提取： 使用配套的病毒 RNA 提取试剂盒提取样本中的总 RNA。
试剂配制（冰上操作）： 按照说明书比例（如 N+2 法，N 为样本数）混合反应液和酶，分装到 PCR 管中。
加样： 向分装好的反应管中分别加入 5-10 μL 的模板 RNA（样本、阴性对照、阳性对照）。
上机扩增： 将 PCR 管放入荧光定量 PCR 仪中。
5. 反应程序与结果判读
推荐反应程序：
逆转录： 50℃，15-30 分钟。
预变性： 95℃，5-10 分钟。
PCR 循环： 95℃ 15 sec → 60℃ 30-45 sec（收集荧光），40-45 个循环。
结果判读标准：
阳性（+）：
扩增曲线呈典型的 S 型指数增长。
Ct 值 ≤ 35（或说明书设定的阈值）。
结论：样本中检出 IPNV 病毒核酸。
阴性（-）：
无 Ct 值，或 Ct 值 > 35（或无扩增曲线）。
结论：样本中未检出 IPNV 病毒核酸。
实验有效性：
阳性对照： 必须有明显扩增（Ct 值在预期范围内）。
阴性对照： 必须无扩增（无 Ct 值）。
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关键字： 传染性胸膜肺炎放线杆菌;检测试剂盒;荧光PCR法;
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