产品简介
RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞及组织快速裂解液。RIPA(Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液有很多配方,按其裂解效果主要分为强, 中,弱三种。RIPA 强解液裂解组织、细胞得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western 等对蛋白活性没有严格要求的实验。本产品主要成分包含 50 mM Tris-HCl (pH 7.4),150 mMNaCl,1 mM EDTA-2Na,1% Triton X-100,1%脱氧胆酸钠及 0.1% SDS。本产品适用于动物或植物组织及细胞样品,也可用于真菌或细菌样品。
使用说明
需自备蛋白酶抑制剂。RIPA 裂解液(强)在临用前需加入蛋白酶抑制剂,根据不同样本添加不同蛋白酶抑制剂防止蛋白降解。
对于组织样品:
1. 组织块用预冷 PBS洗涤,去除血污,剪成细小碎块置于匀浆器中。
2. 加入 10 倍组织体积 RIPA 裂解液(强)低温匀浆
注:RIPA 裂解液(强)的使用量可按照约每 50 mg 组织与 500uL 裂解液的比例添加。如组织蛋白含量较低,可降低裂解液的用量，以提高粗提溶液中的蛋白浓度。
3. 将匀浆液转移至 1.5 mL 离心管中,振荡。冰浴 30 min,期间每 10 min 用移液器反复吹打,确保组织细胞完全裂解;
4. 12000 g 离心 5 min,收集上清,即为总蛋白溶液。
对于贴壁细胞样品:
1. 用 PBS 清洗细胞 2-3 次,最后一次彻底吸干残留液。
2. 按照 6 孔板每孔细胞 250uL 裂解液的比例吸取 RIPA 裂解液(强)于细胞培养板、瓶内,反复晃动培养板、瓶,使裂解液与细胞充分接触 3-5 min。
3. 用细胞刮刀将细胞刮下,收集到离心管中。
4. 冰上裂解 30 min。
5. 12000 g 离心 5 min,收集上清,即为总蛋白溶液。
对于悬浮细胞样品:
1. 离心收集细胞。
2. 按照 6 孔板每孔细胞 250uL 裂解液的比例将细胞液与 RIPA 裂解液(强)混合,振荡。
3. 冰浴 30 min,期间每 10 min 用移液器反复吹打数次,确保细胞完全裂解。
4. 12000 g 离心 5 min,收集上清,即为总蛋白溶液。
对于细菌或真菌样本:
1.取 1 mL 菌悬液,离心去上清,PBS 洗涤一次,充分去除液体。涡旋使菌体尽量分散。
2.加入 100-200uL RIPA 裂解液(强),轻轻涡旋使菌体与裂解液充分混匀。
3.冰浴 10 min,期间每 2 min 用移液器反复吹打数次,确保菌体完全裂解。
4.12000 g 离心 5 min,收集上清,即为总蛋白溶液。
注意事项
1. 组织或细胞裂解时可能会出现粘稠状。可用移液器反复吹打或涡旋仪振荡,直至呈液状为止。如果一直较稠,可再加入适量裂解液。
2. 本试剂不含有蛋白酶抑制剂,需自备蛋白酶抑制剂并在临用前加入。
3. 操作时请穿实验服,并佩戴一次性手套。
4. 本产品仅用于科研,不用于临床诊断和治疗。
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