产品介绍 本公司在无苯酚、氯仿 RNA 快速提取技术基础上,又独家研发成功基因组 DNA 清除柱技术可以有效清除gDNA 残留,得到的RNA 一般不需要DNase 消化,可用于反转录PCR、荧光定量 PCR 等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞 RNA 酶, 离心沉淀去除多糖多酚和次级代谢产物,然后裂解混合物用乙醇调节RNA 结合吸附到基因组DNA 清除柱,然后 RNA 被选择性洗脱滤过, 吸附在基因组 DNA 清除柱上的残留 DNA 无法洗脱连同柱子一起丢弃从而清除掉 DNA。滤过的 RNA 用乙醇调节结合条件后,RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的 RNase free H2O 将纯净 RNA 从硅基质膜上洗脱。 产品组成 储存条件 本试剂盒在室温储存12 个月不影响使用效果。 注意事项 1. 所有的离心步骤均可在室温完成(4℃离心也可以),使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 需要自备β-巯基乙醇,乙醇,研钵(可选)。 3. 样品处理量绝对不要超过基因组清除柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力,否则造成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时,如果不清楚样品DNA/RNA含量时可使用较少的样品处理量,将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。 4. 裂解液CLB、RLT Plus和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时戴乳胶手套,避免 沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或生理盐水冲洗。 5. 关于DNA 的微量残留: 一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留(DNase消化也无法做到 100%无残留),本公司 RNA 提取产品,由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组 DNA 清除柱技术,绝大多数 DNA 已经被清除,不需要 DNase 消化,可直接用于反转录 PCR 和荧光定量 PCR。个别特殊情况如 DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的 mRNA 表达量分析荧光定量 PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时: 1). 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。 2). 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。 3). 将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。 4). 在步骤去蛋白液RW1漂洗前,直接在吸附柱RA上进行DNase I柱上消化处理
苏州博雷兹生物科技有限公司
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