技术原理
基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，靶序列扩增时Taq酶切割探针，释放荧光信号。
定量分析：通过荧光强度增长实时监测扩增产物，结合标准曲线计算模板初始浓度。
产品名称 | 细辛探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix et Rhizoma Asari Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4945 |
产品组分
| 成分 | 规格 | 功能 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶及Taq酶 |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL | 标准品稀释 |
| 细辛特异性引物混合液 | 100μL | 靶序列扩增 |
| 细辛qPCR探针 | 50μL | 荧光信号标记 |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备 |
| 说明书 | 1份 | 操作指南 |
操作步骤
1. 标准曲线制备（样本制备区）
将阳性对照按10倍梯度稀释（10⁷~10²拷贝/μL），标记离心管（7~2号），每步换枪头避免污染。
2. 样本RNA提取
建议设置阴性对照（NC，水）和阳性对照（PC，稀释阳性模板）。
兼容多数RNA提取试剂，推荐柱式纯化法。
3. qPCR反应体系配制（试剂准备区）
按以下比例配制（20μL/管）：
缓冲液：10μL
酶混合液：2μL
探针：1μL
引物混合液：2μL
模板：5μL（样本/标准品/阴性对照）
4. 扩增程序（扩增区）
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 40循环 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |
数据分析
定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct≤35，典型扩增曲线；
阴性：Ct≥40或无扩增；
可疑（35<Ct<40）：需复测确认。
注意事项
分区操作：样本制备、试剂配制、扩增需独立区域，避免交叉污染。
质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。
防污染措施：使用带芯枪头、紫外消毒台面及移液器。
储存：组分使用前短暂离心混匀，避免反复冻融。
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关键字： 细辛;染料法荧光定量;PCR试剂盒;
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