马勃探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 马勃探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Lasiosphaera seu Calvatia Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5045 |
产品原理
本试剂盒基于实时荧光定量PCR(qPCR)技术,采用探针法原理:
探针设计:5'端标记荧光报告基团(如FAM),3'端标记淬灭基团,探针与靶序列特异性结合。
信号释放:PCR扩增时,Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针,使报告基团与淬灭基团分离,释放荧光信号。
定量分析:通过监测荧光强度增长(Ct值)实现靶序列的定性与定量检测。

产品组成
| 成分 | 规格 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 马勃特异性引物混合液 | 100μL |
| 马勃qRT-PCR探针 | 50μL |
| 阳性对照(1×10⁸拷贝/μL) | 50μL |
| 说明书 | 1份 |
注:需自备样品RNA模板。
技术特点
高灵敏度:引物与探针针对马勃保守区设计,检测限低至10²拷贝/μL。
特异性强:不与相近物种RNA发生交叉反应。
即开即用:预混优化试剂,简化操作流程。
质控完善:提供阳性对照,区分假阴性结果。
操作步骤
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释(10²~10⁷拷贝/μL),独立分区操作以避免污染。
2. RNA提取
使用兼容的RNA提取试剂盒制备样品RNA,建议设置阴性对照(水)和阳性对照(稀释阳性模板)。
3. qPCR反应体系(20μL)
| 成分 | 体积 |
| qRT-PCR缓冲液 | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL |
| 探针 | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL |
| 模板RNA | 5μL |
反应程序:
逆转录:50℃ 30分钟
预变性:94℃ 10分钟
扩增(40循环):94℃ 15秒 → 60℃ 60秒(采集FAM信号)
结果判读
定量分析:以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴,计算样品浓度。
定性分析:
阳性:Ct≤35,扩增曲线呈典型S型。
阴性:Ct≥40或无扩增。
可疑(35<Ct<40):需复测确认。
注意事项
严格分区操作(试剂配制、样品处理、扩增区),避免交叉污染。
所有离心管及枪头需无核酸酶污染。
仅限科研使用,不可用于临床诊断。
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