黄连探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 黄连探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Rhizoma Coptidis Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5084 |
预期用途
本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，通过探针法特异性检测黄连（Rhizoma coptidis）的核酸序列，适用于科研领域对黄连的定性或定量分析，不可用于临床诊断。
检验原理
采用TaqMan探针法：
探针设计：针对黄连基因保守区域设计特异性引物及探针（5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团）。
信号释放：PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。
实时检测：通过荧光定量PCR仪监测扩增曲线，实现靶序列的定性与定量分析。
试剂组成
| 成分 | 规格（50次） |
| qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 酶混合液 | 100μL（含逆转录酶） |
| 引物混合液 | 100μL（特异性引物） |
| TaqMan探针 | 50μL |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL（非活体DNA片段）|
| 阴性对照 | 50μL（无核酸酶水） |
| 说明书 | 1份 |
操作步骤
标准曲线制备：
将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），用于定量分析。
样本处理：
自备RNA提取试剂，提取样本RNA（建议使用柱式提取法）。
反应体系配制（20μL/管）：
加入10μL缓冲液、2μL酶混合液、1μL探针、2μL引物混合液、5μL模板RNA。
PCR程序：
逆转录：50℃ 30分钟 → 预变性：94℃ 10分钟 → 扩增（40循环）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）。
结果判读
定量分析：以标准曲线计算样本拷贝数。
定性分析：
阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型。
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线。
可疑（35<Ct<40）：需重复检测。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。
探针避光保存，避免反复冻融（≤7次）。
阳性对照为人工合成DNA片段，无生物传染风险。
适用仪器
ABI 7500、Bio-Rad CFX96、LightCycler等荧光定量PCR仪（需兼容FAM通道）。
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