产品用途
科研用途，适用于桑枝（Ramulus mori）的分子鉴定，禁止用于临床诊断。
产品名称 | 桑枝探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Ramulus Mori Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4990 |
技术原理
采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术，结合TaqMan探针法：
探针设计：针对桑枝保守基因序列（如ITS区或叶绿体基因）设计特异性引物及探针，探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。
信号检测：扩增过程中，Taq酶切割探针释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现靶序列的定性与定量分析。
核心特点
高特异性：引物与探针经优化，可区分桑枝与其他近缘植物。
灵敏度：最低检测限达100–1000拷贝/反应。
即开即用：预混试剂含缓冲液、酶、引物、探针及对照，用户仅需提供DNA/RNA模板。
防污染设计：阳性对照为无传染性DNA片段，分区操作要求严格。
试剂盒组分
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | PCR预混液（含酶） | 1 mL |
| 试剂二 | 桑枝特异性引物/探针混合液 | 100 μL |
| 试剂三 | 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL |
| 试剂四 | 超纯水（阴性对照） | 1 mL |
| 说明书 | 操作手册 | 1份 |
操作步骤
1. 样本处理
DNA提取：使用兼容的DNA提取试剂盒制备样本，要求OD₂₆₀/₂₈₀=1.8–2.0。
对照设置：
阳性对照：稀释阳性对照至10²–10⁷拷贝/μL梯度。
阴性对照：超纯水。
2. PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积 |
| PCR预混液 | 10 μL |
| 引物/探针混合液 | 2 μL |
| DNA模板 | 5 μL |
| 超纯水（补足体积） | 3 μL |
3. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 30 sec | 35 |
| 退火/延伸 | 55–60℃ | 40 sec | |
| 荧光采集 | 退火阶段（FAM通道） | |
结果判读
阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型。
阴性：无Ct值或Ct值＞40。
质控要求：
阳性对照Ct值≤30，阴性对照无扩增。
若阴性对照出现扩增或阳性对照无信号，实验无效需重做。
注意事项
防污染：严格分区操作（试剂配制、样本处理、扩增区），使用一次性耗材，实验后紫外消毒台面。
试剂保存：避免反复冻融（≤3次），探针需避光。
局限性：
假阳性风险：扩增产物污染或交叉污染。
假阴性可能：样本中存在PCR抑制物或模板降解。
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