肉苁蓉探针法PCR鉴定试剂盒

技术原理

采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。扩增时Taq酶的5'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，通过检测荧光强度实现靶序列的定量与定性分析。

三步流程：

反转录：将RNA模板逆转录为cDNA。

扩增：通过PCR扩增目标片段。

检测：实时监测荧光信号，分析Ct值。

产品特点

高灵敏度与特异性：引物及探针针对肉苁蓉高度保守区设计，避免交叉反应。

即开即用：用户仅需提供RNA模板，试剂盒含预混缓冲液、酶、引物及探针。

双重检测模式：支持定性与定量分析（线性范围：5个数量级）。

质控保障：提供阳性对照（无传染性DNA片段）及阴性对照。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |

| 肉苁蓉探针法引物混合液 | 100μL |

| 肉苁蓉qRT-PCR探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（以10倍梯度稀释为例）：

标记6管（6至1号），每管加45μL稀释液。

依次稀释阳性对照（10⁷至10²拷贝/μL），冰上保存。

2. RNA提取：

建议设置N+2样本（含阳性/阴性对照），兼容常规RNA提取方法。

3. qRT-PCR反应（20μL体系）：

按比例加入缓冲液、酶、探针、引物及模板（详见说明书表格）。

反应程序：

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

40循环：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）

4. 数据分析：

定量：以Ct值绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性：Ct≤35为阳性，≥40为阴性；36-40需复测。

储存与运输

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：泡沫箱加冰密封，确保低温。

注意事项

分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免污染。

使用带芯枪头及一次性耗材，实验后消毒台面（10%次氯酸或75%酒精）。

阳性对照单独存放，严禁用于临床。

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