技术原理
基于探针法荧光定量PCR技术，通过Taq酶的5’核酸外切酶活性切割与靶序列结合的探针（5’端标记荧光报告基团，3’端标记淬灭基团）。扩增过程中，探针被切割后释放荧光信号，通过实时检测荧光强度实现靶序列的定量分析。
产品名称 | 蕲蛇探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Agkistrodon Acutus Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5015 |
产品特点
高灵敏性：优化的引物和探针设计，检测下限可达10²拷贝/μL。
高特异性：针对蕲蛇高度保守序列设计，避免与其他物种交叉反应。
即开即用：预混缓冲液和酶体系，仅需提供样品RNA/DNA模板。
内置对照：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），便于区分假阴性结果。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 | 功能 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶和Taq酶 |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL | 用于标准曲线稀释 |
| 蕲蛇qRT-PCR引物混合液 | 100μL | 特异性扩增引物 |
| 蕲蛇qRT-PCR探针 | 50μL | 荧光标记探针 |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL | 标准品定量参考 |
操作步骤
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），独立操作避免污染。
2. 样品制备
提取待测样本RNA/DNA，建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。
3. PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积 |
| qRT-PCR缓冲液 | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL |
| 探针 | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL |
| 模板RNA/DNA | 5μL |
4. 反应程序
逆转录：50℃ 30分钟
预变性：94℃ 10分钟
扩增（40循环）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性检测：阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤30且扩增曲线典型。
注意事项
操作需在无核酸污染的环境中进行，建议使用带滤芯枪头。
试剂解冻后需充分混匀，避免反复冻融。
本产品仅限专业实验室使用，不适用于临床诊断。
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