广藿香探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 广藿香探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Herba Pogostemonis Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5107 |
产品概述
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于广藿香（Pogostemon cablin）的快速、高特异性核酸鉴定。适用于科研领域，可实现对广藿香RNA的定性或定量分析，具有高灵敏度和低交叉反应性。
技术原理
采用实时荧光定量PCR技术，通过5'核酸外切酶活性的Taq酶切割探针，释放荧光信号（FAM通道）。探针与广藿香高度保守序列特异性结合，避免与其他RNA交叉反应。
试剂盒组成
探针法qRT-PCR缓冲液（500μL）
酶混合液（100μL，含逆转录酶及Taq酶）
荧光PCR模板稀释液（1mL）
广藿香特异性引物及探针混合液（100μL）
阳性对照（1×10^8拷贝/μL，50μL）
说明书（1份）
实验步骤
标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。
标记离心管（7~2号），依次加入稀释液与阳性对照，涡旋混匀。
样本RNA提取
使用兼容的RNA提取试剂盒，建议设置阴性对照（水）和阳性对照（稀释阳性模板）。
PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |
| qRT-PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 探针 | 1 | 1 | 1 |
| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 样本RNA | 5 | - | - |
| 超纯水 | - | 5 | - |
| 标准曲线稀释液 | - | - | 5（对应梯度） |
扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec |
| | 60℃ | 1 min（荧光采集） |
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性检测：
阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤30且扩增曲线典型。
样本Ct≤35为阳性；≥40为阴性；35~40需复测。
注意事项
仅限科研使用，不可用于临床诊断。
操作需在无菌环境下进行，避免RNA降解。
不同批次试剂避免混用。
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