瓜蒌探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 瓜蒌探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Fructus trichosanthis Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5111 |
技术原理
基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法技术：
探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。Taq酶的5'核酸外切酶活性在扩增过程中切割探针，释放荧光信号，实现实时定量。
检测流程：
反转录（若检测RNA）：将RNA逆转录为cDNA。
扩增与检测：通过荧光信号增长动态分析起始模板量。
产品特点
高灵敏度与特异性：引物及探针针对瓜蒌（Trichosanthes kirilowii）保守序列设计，避免交叉反应。
即开即用：用户仅需提供RNA模板，试剂盒含预混缓冲液、酶、引物及探针。
质量控制：提供阳性对照（1×10⁸拷贝/μL，无传染性DNA片段），便于区分假阴性。
适用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |
| 瓜蒌qRT-PCR引物混合液 | 100μL |
| 瓜蒌qRT-PCR探针 | 50μL |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |
| 说明书 | 1份 |
操作步骤
1. 标准曲线制备（6个梯度稀释，10²~10⁷拷贝/μL）：
使用阳性对照按10倍梯度稀释，避免交叉污染。
2. RNA提取：
建议设置阴性对照（水）和阳性对照（稀释阳性模板）。
3. qPCR反应体系（20μL）：
| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |
| 缓冲液 | 10μL | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 探针 | 1μL | 1μL | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| RNA模板 | 5μL | - | - |
| 标准品 | - | - | 5μL |
| 超纯水 | - | 5μL | - |
4. 反应程序：
逆转录：50℃ 30分钟
预变性：94℃ 10分钟
PCR循环（40次）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）
数据分析
定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。
定性判定：
阳性：Ct≤35，扩增曲线明显；
阴性：Ct≥40；
可疑（35<Ct<40）：需复测。
注意事项
储存与运输：-20℃避光保存，避免反复冻融。
污染控制：操作分区（样品制备、扩增），使用带滤芯枪头。
适用范围：仅限科研，严禁临床使用。
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