蒲黄探针法PCR鉴定试剂盒

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于蒲黄（Pollen typhae）的特异性鉴定，具有高灵敏度、强特异性和稳定性。适用于科研用途，包含预混反应体系、引物探针组合及阳性对照，实现“即开即用”，用户仅需提供DNA模板。

产品特点

高特异性：引物与探针经优化设计，仅靶向蒲黄基因，无交叉反应。

灵敏度高：可检测低至1×10^4拷贝/μL的模板浓度。

便捷性：含预混MasterMix（含染料），扩增后可直接电泳检测。

质控完善：提供阳性对照（1×10^8拷贝/μL）及阴性对照，确保结果可靠性。

稳定性：-20℃保存一年，避免反复冻融。

规格与成分

| 成分 | 规格/包装 | 用途说明 |

| 探针法PCR MasterMix | 1 mL（红盖） | 预混反应液（含dNTPs、酶等） |

| 蒲黄引物探针混合液 | 100 μL（白盖） | 特异性扩增与信号检测 |

| 阳性对照（黄盖） | 50 μL（1×10^8拷贝/μL） | 质控标准品 |

| 超纯水（亮黄盖） | 1 mL | 反应体系稀释 |

| 核酸释放剂（绿盖） | 1 mL（试用装20次）| 样本DNA提取辅助 |

| 使用手册 | 1份 | 操作指南 |

操作流程

1. 样本DNA制备

使用核酸提取试剂盒或本试剂盒附赠的核酸释放剂提取样本DNA。

设置N+2个样本（含阳性/阴性对照），阳性对照为10^5拷贝/μL的稀释液。

2. PCR反应体系（20 μL）

| 组分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 阳性对照（μL） |

| 探针法MasterMix | 10 | 10 | 10 |

| 引物探针混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 样本DNA | 8 | — | — |

| 阴性对照（水） | — | 8 | — |

| 阳性对照稀释液 | — | — | 8 |

3. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |

| 扩增循环 | 95℃ | 15 sec | 35 |

| | 57℃ | 15 sec（荧光采集） |

| | 72℃ | 40 sec |

| 最终延伸 | 72℃ | 10 min | 1 |

4. 结果分析

定量检测：以标准曲线（Ct值-log浓度）计算样本拷贝数。

定性检测：Ct≤36为阳性，≥40为阴性；36<Ct<40需复测。

注意事项

防污染：分区操作（样本处理/PCR/产物分析），使用一次性耗材。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融；阳性对照单独存放。

实验质控：阴性对照无扩增，阳性对照Ct值≤36方为有效。

重复性建议：低浓度样本建议重复检测或10倍稀释后复测。

常见问题处理

无扩增信号：检查试剂活性、模板质量或优化退火温度。

非特异性条带：确认引物特异性或减少模板用量。

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