狗脊探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 狗脊探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Rhizoma Cibotii Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5116 |
产品概述
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术（qPCR），专用于狗脊（Rhizoma cibotii）的快速、高特异性鉴定。通过靶向保守基因序列设计引物与探针，实现对样本中狗脊成分的定性与定量分析，适用于科研领域（不可用于临床诊断）。
技术原理
探针法qPCR：
探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，实时监测扩增进程。
通过标准曲线计算模板初始浓度，灵敏度可达10<sup>3</sup>拷贝/反应。
检测流程：
反转录（若检测RNA）：将RNA逆转录为cDNA。
扩增与检测：40个循环的变性（94℃）、退火/延伸（60℃），采集FAM通道荧光信号。
产品组成
| 成分 | 规格 | 保存条件 |
| qPCR缓冲液 | 500 μL | -20℃ |
| 酶混合液 | 100 μL | -20℃ |
| 引物混合液 | 100 μL | -20℃ |
| 狗脊特异性探针 | 50 μL | -20℃ |
| 阳性对照（1×10<sup>8</sup>拷贝/μL） | 50 μL | -20℃ |
| 模板稀释液 | 1 mL | 室温 |
样本要求
样本类型：组织、细胞、血液、细菌等（需避免反复冻融）。
RNA/DNA提取：建议使用柱式提取法，避免抑制剂残留。
保存条件：液氮、-80℃或Trizol中保存（RNA样本需防降解）。
实验步骤
标准曲线制备：
将阳性对照10倍梯度稀释（10<sup>2</sup>–10<sup>7</sup>拷贝/μL），每个浓度设复孔。
反应体系（20 μL）：
| 组分 | 体积 |
| qPCR缓冲液 | 10 μL |
| 酶混合液 | 2 μL |
| 引物混合液 | 2 μL |
| 探针 | 1 μL |
| 模板（样本/标准品） | 5 μL |
扩增程序：
50℃ 30 min（反转录）；94℃ 10 min（预变性）；40循环（94℃ 15 sec → 60℃ 1 min）。
数据分析
定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性判定：
阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线呈S型。
可疑：35 < Ct < 40，需复测。
阴性：Ct ≥ 40或无扩增。
注意事项
分区操作：试剂配制、样本处理、PCR扩增需在独立区域进行，避免污染。
质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。
探针保护：避光保存，避免反复冻融。
适用范围：仅限科研使用，临床诊断需经额外验证。
储存与运输
储存：-20℃避光保存，有效期12个月。
运输：低温干冰或冰袋运输。
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