甘草探针法PCR鉴定试剂盒

甘草探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

检测原理

本试剂盒基于TaqMan探针法荧光定量PCR技术，通过特异性引物和探针靶向甘草基因组保守区域，实现高灵敏度、高特异性的核酸扩增检测。适用于：

定性检测：判断样品中是否含有甘草DNA。

定量检测：通过标准曲线计算模板浓度（线性范围：10^1~10^6拷贝/μL）。

产品组成

探针法qPCR缓冲液（500μL）

探针法qPCR酶混合液（50μL）

荧光PCR专用模板稀释液（1mL）

PCR引物-探针干粉（50T）

PCR阳性对照（10^7拷贝/μL，50μL）

操作步骤

1. 标准曲线制备

阳性对照梯度稀释（10倍稀释，6个梯度）。

标记离心管（6~1号），每管加入45μL稀释液。

依次加入5μL上一步稀释液，震荡混匀，冰上保存。

2. 样品DNA提取

使用兼容的DNA提取试剂盒制备模板，建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。

3. qPCR反应体系（20μL）

按比例混合缓冲液、酶液、引物探针及模板DNA。

推荐程序：

逆转录：50℃ 10min

预变性：95℃ 10min

扩增循环（40次）：95℃ 15sec → 60℃ 60sec（采集FAM通道信号）

4. 数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，推算样品浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤38，扩增曲线明显。

可疑：38<Ct<40，需复测确认。

阴性：Ct≥40或无扩增。

性能参数

特异性：不与近缘物种DNA交叉反应。

灵敏度：最低检测限10^1拷贝/μL。

重复性：批内/批间变异系数≤5%。

注意事项

分区操作：样品处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。

质量控制：每批实验需包含阴/阳性对照，确保结果有效性。

样本要求：DNA应无降解，A260/A280比值1.8~2.0。

保存与运输：短期-20℃，长期-70℃；避免反复冻融。

局限性

检测结果受样本质量、提取方法及操作规范影响。

基因突变可能导致假阴性；交叉污染可能导致假阳性。

本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断。

公司正在出售的产品