浮萍探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 浮萍探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Herba Spirodelae Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5122 |
产品基本信息
规格：50T（50次反应，20μL体系/次）
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；运输需低温（冰袋或干冰）。
适用范围：科研用途，不适用于临床诊断。
性能特点
高灵敏度：检测限达几百拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。
特异性强：引物及探针针对浮萍保守序列设计，无交叉反应。
即开即用：预混试剂含荧光定量PCR所需组分（引物、探针、酶、dNTPs等），用户仅需提供模板DNA。
防污染设计：一管式闭管检测，避免扩增产物污染；提供无传染性DNA片段作为阳性对照。
质控保障：含阴/阳性质控品，实验有效性需满足：
阴性对照：无扩增曲线或Ct值≥40。
阳性对照：Ct值≤32或≤36（科博瑞/），扩增曲线呈指数期。
实验流程
1. 标准曲线制备（以10倍梯度稀释为例）
标记离心管（6管，编号6至1），每管加45μL专用稀释液。
取试剂盒提供的阳性对照（1×10^8拷贝/μL），依次稀释至10^6–10^1拷贝/μL（每步换枪头，冰上操作）。
2. 样品DNA提取
建议设置N+2样本（N待测样品+1阳性对照+1阴性对照）。
推荐使用柱式DNA提取试剂盒，或兼容的市售提取方法。
3. qPCR反应体系（20μL）
按以下比例配制（需避光操作）：
预混液：15μL
模板DNA：5μL（标准品/待测样品/阴性质控水）
程序设置（以ABI 7500为例）：
95℃ 10min（预变性）→ 40循环（95℃ 15s → 60℃ 60s，采集荧光）。
数据分析
定量检测：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样品拷贝数。
定性检测：
Ct≤36判为阳性；Ct≥40判为阴性；36<Ct<40需复测。
注意事项
分区操作：试剂配制、样本处理、扩增需在独立区域进行，避免交叉污染。
耗材要求：使用无核酸酶枪头/离心管，操作全程佩戴手套。
试剂处理：解冻后涡旋混匀，短暂离心；避免反复冻融（建议分装）。
仪器校准：定期校验荧光定量PCR仪的光学系统及温度控制模块。
免责声明
本产品仅限科研使用，不可用于医疗诊断、食品或环境安全检测等非科研领域。实验设计需符合当地生物安全规范。
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