六种致泻大肠杆菌六重探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 六种致泻大肠杆菌六重探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Six Species of Diarrheagenic Escherichia coli Six-plex Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5279 |
预期用途
本试剂盒用于检测六种致泻大肠杆菌的核酸，适用于科研场景下的辅助诊断，结果需结合其他临床指标综合判断。不可用于临床诊断或治疗。
检验原理
采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术，针对六种致泻大肠杆菌的保守基因区域设计特异性引物和探针，通过荧光信号实时监测扩增过程，实现核酸的定性和定量分析。
试剂组成
| 组分名称 | 规格 |
| 六种致泻大肠杆菌扩增液 | 25μL×1管 |
| 六种致泻大肠杆菌反应液 | 975μL×1管 |
| 阳性质控品 | 50μL×1管（人工合成DNA片段） |
| 阴性质控品 | 50μL×1管 |
| 说明书 | 1份 |
注意：不同批号试剂不可混用。
储存与运输
储存条件：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（≤7次）。
有效期：12个月。
运输：低温冰袋（2~8℃）。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括：
ABI系列（如7500、StepOnePlus）
MX3000P/3005P
LightCycler（Roche）
Bio-Rad（CFX系列）
Eppendorf Mastercycler
需自备耗材：无核酸酶离心管、滤芯吸头、移液器等。
样本要求
样本类型：粪便、全血、血清、拭子（咽喉/肛门）、呼吸道分泌物等。
处理要求：
避免交叉污染，采集后立即检测或-20℃短期保存（长期需-70℃）。
推荐使用配套核酸提取试剂盒（如Hypure病毒基因组DNA提取试剂盒）。
操作步骤
DNA提取：按标准方法提取样本核酸，建议使用商品化试剂盒。
试剂配制：
反应体系：19.5μL反应液 + 0.5μL扩增液/孔。
分装后加入5μL模板（样本/阴阳对照）。
PCR扩增程序：
预变性：95℃ 3分钟（1循环）。
扩增：95℃ 15秒 → 55℃ 30秒（40循环），不采集荧光。
结果判读：
阳性：Ct≤35，指数扩增曲线。
可疑：35<Ct≤38，需复检。
阴性：无Ct值或Ct>38。
性能指标
灵敏度：1.0×10³ copies/mL。
特异性：与相近菌株无交叉反应。
精密度：批内/批间CV≤3%。
注意事项
分区操作（试剂配制、样本处理、扩增），避免污染。
反应液避光保存，使用前充分混匀离心。
阳性对照需单独存放，防止污染其他组分。
失效或异常结果可能源于样本保存不当、提取效率低或仪器校准问题。
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