肠道病毒71型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 肠道病毒71型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Enterovirus 71 Probe-based Real-time RT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5314 |
预期用途
本试剂盒用于定性检测人粪便、咽拭子、疱疹液或脑脊液样本中的肠道病毒71型（EV71）RNA。适用于临床手足口病（HFMD）病原体筛查、疫情监控及流行病学研究。
注意：检测结果需结合临床症状及其他诊断指标综合判断，不可作为唯一诊断依据。
检测原理
采用探针法实时荧光RT-PCR技术：
RNA提取：样本中病毒RNA经纯化富集。
反转录（RT）：RNA逆转录为cDNA。
定量PCR扩增：
特异性引物：靶向EV71 VP1基因保守区域。
TaqMan探针：5'端标记FAM荧光基团，3'端标记淬灭基团（BHQ1）。
荧光信号释放：探针水解后，FAM荧光强度与病毒RNA量成正比。
结果判定：根据Ct值（循环阈值）判断病毒载量。
主要组分
| 组分名称 | 规格（48测试） | 储存条件 |
| RT-PCR反应液 | 1.2 mL | -20℃避光 |
| EV71引物探针混合液 | 150 μL | -20℃避光 |
| RT酶混合液 | 50 μL | -20℃ |
| DNA聚合酶 | 40 μL | -20℃ |
| 阴性对照（DEPC水） | 1 mL | -20℃ |
| 阳性对照（EV71假病毒） | 200 μL | -20℃ |
储存及有效期
储存条件：-20℃避光保存（避免反复冻融）。
有效期：12个月。
适用仪器
兼容主流实时荧光PCR仪：
Bio-Rad CFX96
ABI 7500/QuantStudio 5
Roche LightCycler 480
其他支持FAM通道的机型。
样本要求
| 样本类型 | 采集要求 | 保存条件（≤72h） |
| 粪便 | 取1–2 g置于无菌管 | 2–8℃ |
| 咽拭子 | 用病毒保存液浸润后放入采样管 | 2–8℃ |
| 疱疹液 | 无菌针吸取后置入生理盐水 | -20℃ |
| 脑脊液 | 无菌采集0.5–1 mL | 2–8℃ |
注意：样本需在提取前彻底混匀，避免反复冻融（≤3次）。
操作流程
1. RNA提取
推荐使用商业化病毒RNA提取试剂盒（如QIAamp Viral RNA Mini Kit）。
2. RT-PCR反应体系配制
| 组分 | 单反应体积 |
| RT-PCR反应液 | 15 μL |
| EV71引物探针混合液 | 2 μL |
| RT酶混合液 | 1 μL |
| DNA聚合酶 | 0.5 μL |
| RNA模板 | 5 μL |
| 总体积 | 23.5 μL|
每批必须设置：
阴性对照（DEPC水替代模板）
阳性对照（试剂盒提供）
3. PCR扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |
| 反转录 | 50℃ | 15 min | 1 | 关闭 |
| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | 关闭 |
| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 | 开启 |
| | 60℃ | 45 sec | | |
结果判读标准
| 结果类型 | 条件（FAM通道） |
| 阳性 | Ct值 ≤ 38.0，且扩增曲线呈“S”型 |
| 阴性 | Ct值 > 38.0 或无Ct值 |
| 无效 | 阳性对照Ct＞38 / 阴性对照出现扩增 |
性能参数
灵敏度：检出限 ≤ 50 copies/mL
特异性：
不与柯萨奇病毒A16（CA16）、埃可病毒等交叉反应；
与正常人源样本无交叉。
精密度：批内/批间CV ≤ 5%。
注意事项
实验需在PCR洁净实验室（分区操作）进行，严防污染。
RNA提取与加样需在生物安全柜内操作。
所有试剂使用前需完全解冻并涡旋混匀。
临床样本需按生物危害品处理（符合《WS/T 797—2022》规范）。
临床意义
EV71感染是导致手足口病重症（如脑炎、肺水肿）的主要病原体。早期快速检测对隔离治疗、疫情控制及预后评估至关重要。
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