产品概述

本试剂盒采用探针法荧光定量RT-PCR技术,专用于水泡性口炎病毒新泽西型(VSV-NJ)RNA的定性或定量检测。通过特异性引物和探针设计,结合Taq酶的5'核酸外切酶活性,实现对靶序列的高灵敏度、高特异性扩增,适用于科研用途(不可用于临床诊断)。
产品名称 | 水泡性口炎病毒新泽西型探针法荧光定量RT-PCR剂盒 | 英文名称 | Vesicular Stomatitis Virus New Jersey Type Probe-based Real-time RT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5225 |

产品组成

核心组分
探针法qRT-PCR缓冲液(500 μL)
酶混合液(含逆转录酶与Taq酶,100 μL)
荧光PCR专用模板稀释液(1 mL)
VSV-NJ引物混合液(100 μL)
VSV-NJ探针(50 μL,5'端标记FAM荧光基团,3'端淬灭基团)
阳性对照(1×10^8拷贝/μL,50 μL)
辅助材料
说明书1份
自备试剂:样本RNA提取试剂(如柱式病毒RNA提取试剂盒)。
技术参数

检测灵敏度:可达10^2拷贝/μL。
线性范围:10^2–10^7拷贝/μL(定量分析时覆盖5个数量级)。
特异性:针对VSV-NJ保守序列设计,无交叉反应。
规格:50次/盒(20 μL反应体系)。
保存条件:-20℃避光保存,有效期12个月。
实验流程

1. 标准曲线制备(以10倍梯度稀释为例)
标记6管(7号至2号),每管加45 μL稀释液。
7号管加入5 μL阳性对照(1×10^8拷贝/μL),震荡混匀,得10^7拷贝/μL标准品。
依次稀释至10^2拷贝/μL(每次换枪头)。
2. 样本RNA提取
建议设置N+2管(含阴性对照NC和阳性对照PC)。
使用兼容RNA提取试剂盒或免提取核酸释放剂。
3. qRT-PCR反应体系(20 μL/管)
| 成分 | 样品管(μL) | 阴性对照(μL) | 标准曲线管(μL) |
| qRT-PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 探针 | 1 | 1 | 1 |
| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 样本RNA/标准品/水 | 5 | 5(水) | 5(标准品) |
4. 反应程序
逆转录:50℃ 30 min
预变性:94℃ 10 min
PCR扩增(40循环):
94℃ 15 sec → 60℃ 1 min(采集FAM信号)
数据分析
定量检测:以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线,计算样本浓度。
定性检测:
阴性对照Ct≥40;阳性对照Ct≤36且呈典型扩增曲线。
样本Ct≤36判为阳性;≥40为阴性;36–40需复测。
注意事项

分区操作:样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行,避免污染。
质量控制:每次实验需包含阴/阳性对照。
安全防护:使用一次性耗材,实验后以10%次氯酸或75%酒精消毒台面。
运输与存储:-20℃低温运输,避免反复冻融。
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