检验原理
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，通过特异性引物和TaqMan探针检测牡蛎疱疹病毒（OsHV）的保守基因序列。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，在扩增过程中Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，实现实时定量分析。
灵敏度：最低检测限达100拷贝/反应。
特异性：引物及探针针对OsHV高度保守区设计，无交叉反应。
线性范围：定量检测时覆盖5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。
产品名称 | 牡蛎疱疹病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Oyster Herpesvirus Probe-based Real-time PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5232 |
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括：
ABI 系列（如7500、StepOnePlus）
安捷伦（MX3000P/3005P）
Roche LightCycler
Bio-Rad（CFX系列）
Eppendorf Mastercycler
试剂盒组分
qPCR预混液：含缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、热启动Taq酶。
引物探针混合液：OsHV特异性引物及探针。
阳性对照：无传染性OsHV DNA片段（1×10^7–10^8拷贝/μL）。
阴性对照：无核酸酶水。
荧光PCR专用模板稀释液。
操作步骤
标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL），每个梯度使用独立枪头操作，避免污染。
标记离心管（6–1号），依次加入稀释液和模板，涡旋混匀后冰上暂存。
样本处理
核酸提取：推荐配套水生动物DNA提取试剂盒，或使用兼容的商用试剂。
质控设置：
阳性对照（PC）：使用稀释后的阳性模板。
阴性对照（NC）：超纯水。
PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积（μL） |
| qPCR预混液 | 10 |
| 引物探针混合液 | 2 |
| 模板DNA | 5 |
| 超纯水 | 补足至20 |
扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 10 min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |
| 退火/延伸/信号采集 | 60℃ | 1 min | |
结果分析
基线设定：选择指数扩增前的稳定信号段（通常6–15循环）。
阈值设定：高于阴性对照荧光峰值。
定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。
质控要求：
阴性对照：Ct≥40或无扩增。
阳性对照：Ct≤35且呈典型S型曲线。
注意事项
操作分区进行（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免交叉污染。
标准品稀释需在独立区域完成。
本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。
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