核心特点
高特异性：针对蛇形隐孢子虫保守基因（如18S rRNA）设计引物与探针，与其他隐孢子虫无交叉反应。
高灵敏度：最低检测限100–500拷贝/mL，适用于低载量样本。
即开即用：预混反应液含酶、dNTPs等，用户仅需提供DNA模板。
闭管操作：一管式反应降低污染风险，支持标准曲线定量分析。
产品名称 | 蛇形隐孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Cryptosporidium serpentis Probe-based Real-time PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5233 |
试剂盒组成
| 组分 | 规格及包装 | 功能说明 |
| 2×qPCR预混液 | 500 μL（棕色管） | 含Taq酶、dNTPs、Mg²⁺等 |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL（黄盖） | 样本稀释及阴性对照配置 |
| 特异性引物混合液 | 100 μL（白盖） | 靶向扩增蛇形隐孢子虫基因 |
| TaqMan探针 | 50–100 μL（棕色管） | 5'端FAM标记，3'端淬灭基团 |
| 阳性对照（人工DNA片段） | 50 μL（1×10⁸拷贝/μL） | 实验有效性验证 |
| 使用手册 | 1份 | 操作流程及质控标准 |
操作流程
1. 样本处理
核酸提取：推荐柱式DNA提取试剂盒，或使用配套核酸释放剂（免提法）。
对照设置：每批次需包含阴性对照（无菌水）和阳性对照（标准品）。
2. 反应体系配置（20μL）
| 成分 | 体积（μL） |
| 2×qPCR预混液 | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 模板DNA | 5 |
| 补水至 | 20 |
注：若仪器需ROX校正（如ABI 7500），需额外加入2μL 10×ROX。
3. PCR扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 10分钟 |
| 循环扩增（40次） | 95℃ | 15秒 |
| | 60℃ | 60秒（采集荧光信号） |
数据分析
定量分析：以阳性对照梯度稀释（10²–10⁷拷贝/μL）绘制标准曲线，计算样本Ct值及拷贝数。
定性判定：
阳性：Ct≤30，扩增曲线呈S型；
阴性：Ct≥36或无信号；
可疑：30<Ct<36，需复测确认。
注意事项
生物安全：操作需在BSL-2实验室进行，避免气溶胶污染。
分区操作：严格区分试剂准备区、样本处理区及扩增区，使用带滤芯枪头。
质控要求：
阴性对照Ct≥40；
阳性对照Ct≤30且曲线正常。
运输与存储：低温运输，-20℃保存，避免反复冻融。
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