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Anti-Flag 亲和凝胶

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-K0217

中文名称：Anti-Flag 亲和凝胶

存储条件：-20℃, 2 年

产品活性：MCE Anti-Flag 亲和凝胶用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中 Flag 标签蛋白的免疫沉淀、蛋白纯化实验。

生物活性：MCE Anti-Flag 亲和凝胶是由高质量的鼠源 lgG2b 单克隆抗体与琼脂糖 Sepharose 4B 共价偶联而得，具有较高的 Flag (DYKDDDDK) 标签融合蛋白结合容量 (>1.1 mg 蛋白/mL)，可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中 Flag 标签蛋白的免疫沉淀 (IP) 实验。 特点： 1. 方便省时 2. 非特异性结合低 3. 样品损失少 4. 载量 > 1.1 mg/mL. 本产品的规格与实际凝胶体积一致，凝胶含量为 50%。

描述及优势：

MCE Anti-Flag 亲和凝胶是由高质量的鼠源 lgG2b 单克隆抗体与琼脂糖 Sepharose 4B 共价偶联而得，具有较高的 Flag (DYKDDDDK) 标签融合蛋白结合容量 (>1.1 mg 蛋白/mL)，可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中 Flag 标签(DYKDDDDK) 蛋白的免疫沉淀 (IP) 实验。

特点：

1. 方便省时

2. 非特异性结合低

3. 样品损失少

4. 载量 > 1.1 mg/mL.

本产品的规格与实际凝胶体积一致，凝胶含量为 50%。

操作流程：1. 凝胶预处理 1.1 将 Anti-Flag 亲和凝胶重悬混匀，吸取 10 μL 凝胶悬液 (约 5 μL 凝胶) 至干净的 1.5 mL 离心管。1.2 加入 600 μL 洗涤缓冲液，混合均匀，10,000 rpm 离心 30 秒，弃去上清。重复 3-4 次。 注：小心吸取上清，避免凝胶损失。2. 样品的结合2.1 在上述清洗干净的凝胶中加入 500 μL 细胞裂解液。充分混匀后，置于翻转混合仪上孵育，4℃ 孵育 2 小时 (如需提高结合效率，可延长至过夜)。2.2 10,000 rpm 离心 30 秒，将上清转移至新离心管 (上清液可用于检测 Flag 标签蛋白是否有残留)。3. 洗涤在上述分离得到的凝胶中加入 500 μL 洗涤缓冲液，充分混悬凝胶，10,000 rpm 离心 30 秒，弃去上清。重复以上洗涤步骤 3 次以上，直到洗涤后的上清液中 OD280 小于 0.05 为止。注意：如上清液的 OD280 大于 0.05，适当增加洗涤次数即可。4. 洗脱本说明书提供三种 Flag 标签蛋白洗脱方案，操作者可根据需要选择不同的洗脱方案。4.1 变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。步骤：在上述洗涤干净的凝胶中加入 50 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer，充分混匀后煮沸 5 分钟。10,000 rpm 离心 30 秒，取 4 μL 上清液进行 SDS-PAGE 检测。4.2 酸性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。步骤：在上述洗涤干净的凝胶中加入 50 μL 洗脱缓冲液 A，充分混匀后室温孵育 10 分钟。10,000 rpm 离心 30 秒，收集上清。按照每 50 μL 洗脱液加入 25 μL 中和缓冲液的比例加入中和缓冲液，将洗脱产物 pH 调节至中性，样品可用于后期功能分析。4.3 竞争性洗脱：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。 步骤：在上述洗涤干净的凝胶中加入 30-50 μL 洗脱缓冲液 B。充分混匀后，置于翻转混合仪上孵育，室温孵育 1 小时或 4℃ 孵育 2 小时。10,000 rpm 离心 30 秒，收集上清，即得目的蛋白，样品可用于后期功能分析。

详情参考：www.medchemexpress.cn/inhibitor-kit/anti-flag-affinity-gel.html