表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis，SE）是常见的条件致病菌，尤其与医院获得性感染（如导管相关血流感染、人工关节感染）密切相关。本试剂盒基于荧光定量PCR技术，靶向SE特异性基因SE2593（编码表面粘附蛋白），具有以下核心价值：
快速诊断：2小时内完成检测，远快于传统培养（24-48小时）
生物膜感染鉴别：检测与生物膜形成相关的icaA基因辅助判断感染严重性
耐药性筛查：同步检测mecA基因预测甲氧西林耐药性（MRSE）
院感防控：早发现定植患者，阻断传播链
二、技术原理与创新设计
1. 多重检测体系
靶标基因 荧光通道 临床意义
SE2593 FAM SE种特异性鉴定
icaA HEX 生物膜形成能力评估
mecA CY5 甲氧西林耐药性预测
内参（16S rRNA） ROX 提取与扩增质控
2. 技术优势
高灵敏度：检测限10 CFU/mL（纯培养物）或50 CFU/swab（拭子样本）
抗干扰性：耐受血液、脓液中常见的PCR抑制剂（如肝素、血红蛋白）
防污染设计：dUTP/UNG系统降解既往扩增产物
三、试剂盒组分与储存
1. 核心组分
PCR预混液：含热启动Taq酶、dNTPs、优化缓冲液（冻存管装）
四重引物探针混合液（冻干粉，复溶后50μL/管）
阳性对照：含SE2593、icaA、mecA基因片段
阴性对照：无核酸水（DEPC处理）
提取控制品：人工DNA片段
2. 储存与运输
未开封：-20℃保存12个月，避免反复冻融
复溶后：4℃保存≤1周
运输：干冰或2-8℃冷链
四、样本采集与处理
1. 适用样本类型
样本类型 采集要求 前处理建议
血液 3-5mL（EDTA抗凝） 血浆分离或全血直接裂解
伤口拭子 旋转擦拭伤口深处，置于转运培养基 涡旋震荡后取上清
导管尖端 超声震荡法洗脱生物膜 离心浓缩后裂解
关节液 0.5-1mL无菌穿刺 直接裂解或DNA提取
2. 关键注意事项
采样时机：抗生素使用前采集样本
防污染：严格无菌操作，避免皮肤定植菌污染
核酸提取：
推荐配套磁珠法DNA提取试剂盒
每批加入提取控制品监控效率
五、检测操作流程
1. 反应体系（25μL）
组分 体积 终浓度
2×PCR预混液 12.5μL 1×
四重引物探针混合液 3.0μL 0.6μM/0.3μM
模板DNA 5.0μL ≤100ng
2. 扩增程序
预变性：95℃ 3分钟
40循环：
95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（同步采集FAM/HEX/CY5信号）
3. 质控标准
阳性对照：所有靶标通道Ct值≤30
阴性对照：无扩增
内参基因：16S rRNA Ct值<28