N3 亚型流感病毒检测试剂盒
试剂简介：
检测目标： 甲型流感病毒的N3基因（神经氨酸酶N3亚型）。
产品名称 | N3 亚型流感病毒检测试剂盒 | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1648 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
主要应用：
动物防疫/兽医临床： 主要用于家禽（鸡、鸭、鹅）、猪等动物的禽流感监测，特别是针对H3N3等亚型的检测。
环境监测： 检测活禽交易市场、养殖场环境样本（如粪便、污水、笼具擦拭物）中的病毒。
科研用途： 病毒分离株的鉴定与分型。
检测意义： N3亚型是禽流感病毒中常见的亚型之一，快速检测有助于区分病毒亚型，指导疫苗免疫和疫情扑灭。
2. 检测原理
该类试剂盒主要采用TaqMan荧光探针法实时荧光定量RT-PCR技术：
逆转录（RT）： 由于流感病毒是RNA病毒，试剂盒首先利用逆转录酶将样本中的病毒RNA反转录成cDNA。
特异性扩增： 针对N3基因的高度保守区域设计特异性引物和荧光探针。
荧光检测： 在PCR扩增过程中，探针被水解，荧光基团与淬灭基团分离，发出荧光信号。通过实时监测荧光信号的增加，实现对病毒核酸的定性或定量检测。
3. 试剂盒组成
以常见的50次/盒规格为例，试剂盒通常包含以下组分：
组分名称 规格/体积 保存条件 功能说明
PCR反应液 含引物、探针、dNTPs -20℃避光 核心反应成分，通常已预混
酶混合液 含逆转录酶、Taq酶 -20℃ 催化逆转录和PCR扩增反应
阳性对照 1管 -20℃ 含N3基因片段的质粒或假病毒，用于验证试剂有效性
阴性对照 1管 4℃或-20℃ 无菌生理盐水或缓冲液，用于监控污染
说明书 1份 常温 操作指南及判读标准
4. 样本要求与操作流程
第一步：样本采集
样本类型：
拭子样本： 咽喉拭子、泄殖腔拭子（禽类）、鼻拭子。
组织样本： 发病禽鸟或动物的气管、肺、脾、肝、脑等脏器组织。
液体样本： 粪便悬液、气管冲洗液。
保存： 采集后立即放入病毒采样管，2-8℃保存并尽快送检；长期保存需置于-70℃。
第二步：核酸提取 (关键步骤)
方法： 需使用配套的病毒RNA提取试剂盒（如磁珠法或离心柱法）。
注意： RNA极易降解，操作过程应在冰上进行，并使用无RNase的耗材。
第三步：PCR反应体系配制
解冻： 将反应液和酶液在冰上解冻，振荡混匀并瞬时离心。
配制： 按说明书比例混合反应液、酶液。
分装： 将混合液分装至PCR反应管中（通常为20μL体系）。
第四步：加样
向反应管中加入提取好的RNA模板（通常为5-10 μL）。
设置阴性对照和阳性对照。
第五步：上机扩增
仪器： ABI 7500、LightCycler 480、Bio-Rad CFX96等实时荧光定量PCR仪。
荧光通道： 选择 FAM 通道（报告基团）。
程序（参考）：
逆转录： 42℃-50℃，10-15分钟（1个循环）。
预变性： 95℃，3-5分钟（1个循环）。
PCR循环： 95℃变性15秒，60℃退火/延伸30-45秒（采集荧光），共40-45个循环。
5. 结果判读标准
有效实验判定：
阴性对照（NC）： 无Ct值（或Ct值 > 40），扩增曲线为直线。
阳性对照（PC）： Ct值 ≤ 36，扩增曲线呈典型的“S”型。
样本结果判定：
阳性 (+)： Ct值 ≤ 36，且扩增曲线呈明显的“S”型。表明样本中检测到N3亚型流感病毒核酸。
阴性 (-)： Ct值 > 40 或 无Ct值。表明样本中未检测到N3亚型流感病毒。
可疑 (灰区)： Ct值在 36-40之间。
建议：重新提取核酸或复测。若复测Ct值 < 40且曲线正常，则判为阳性；否则判为阴性。
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