H5N1 亚型禽流感病毒检测试剂盒
1. 检测原理：
该试剂盒基于 TaqMan 荧光探针法（Real-time RT-PCR）。
双重靶标设计（亚型特异性）： 为了精准锁定 H5N1 病毒，试剂盒通常采用双重荧光 PCR技术，同时检测两个基因：
FAM 通道（H5 基因）： 针对 H5 亚型流感病毒的血凝素（HA）基因保守序列。
HEX/VIC 通道（N1 基因）： 针对 N1 亚型流感病毒的神经氨酸酶（NA）基因保守序列。
产品名称 | H5N1 亚型禽流感病毒检测试剂盒 | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1666 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
检测机制： 试剂盒利用逆转录酶将病毒 RNA 转化为 cDNA，再通过 Taq 酶进行扩增。只有当样本中同时检测到 H5 和 N1 的特异性荧光信号时，才能确诊为 H5N1 亚型禽流感病毒感染，这有效避免了与其他亚型（如 H5N2 或 H9N1）的混淆。
2. 检测目标与应用
目标病原： 高致病性禽流感病毒 H5N1 亚型（AIV-H5N1）。
应用领域：
动物疫病监测： 用于家禽养殖场、活禽交易市场的日常监测和净化。
临床辅助诊断： 用于疑似高致病性禽流感（“鸡瘟”）感染禽类的快速确诊。
公共卫生监测： 用于监测 H5N1 病毒向人的跨种传播风险。
样本类型： 咽喉拭子、泄殖腔拭子、血液、肺脏、脾脏等组织匀浆液。
3. 试剂盒组成（典型配置）
根据市场主流品牌的配置，试剂盒通常包含以下组分：
组分名称 规格/含量 作用
RT-PCR 反应液 / Master Mix 1 mL x 1管 (红盖) 含 dNTPs、缓冲液、Mg2等
酶混合液 (Enzyme Mix) 100 μL x 1管 (红盖/黑盖) 含逆转录酶、热启动 Taq 酶
引物/探针混合液 100 μL x 1管 (白盖) 针对 H5 和 N1 亚型特异性设计
阳性对照 (Positive Control) 50 μL x 1管 (黄盖) 含 H5N1 靶基因的质粒 (1×10^8 拷贝/μL)
阴性对照 (Negative Control) 1 mL x 1管 (亮黄色/蓝盖) 无菌超纯水
说明书 1 份 操作指南和参数说明
注：部分试剂盒可能将引物探针与反应液预混，或包含内标（Internal Control）以监控 PCR 抑制。
4. 操作流程简述
样本处理： 采集拭子或组织样本，使用病毒 DNA/RNA 提取试剂盒提取病毒 RNA。
试剂配制（冰上操作）： 按照说明书比例（如 N+2 法，N 为样本数）混合反应液、酶和引物探针，分装到 PCR 管中。
加样： 向分装好的反应管中分别加入 5-10 μL 的模板 RNA（样本、阴性对照、阳性对照）。
上机扩增： 将 PCR 管放入荧光定量 PCR 仪中。
5. 反应程序与结果判读
推荐反应程序：
逆转录： 50℃，15-30 分钟。
预变性： 95℃，5-10 分钟。
PCR 循环： 95℃ 15 sec → 60℃ 30-45 sec（收集荧光），40-45 个循环。
结果判读标准：
阳性（+）：
FAM 通道和 HEX 通道均出现典型的 S 型扩增曲线。
且 Ct 值 ≤ 35（或说明书设定的阈值）。
结论：样本中检出 H5N1 亚型禽流感病毒核酸。
阴性（-）：
FAM 和 HEX 通道均无 Ct 值，或 Ct 值 > 35。
结论：样本中未检出 H5N1 亚型禽流感病毒核酸。
单重阳性（疑似/其他）：
仅 H5 阳性：提示可能存在 H5Nx（非 N1）亚型感染。
仅 N1 阳性：提示可能存在 HxN1（非 H5）亚型感染。
实验有效性：
阳性对照： FAM 和 HEX 通道均需有明显扩增（Ct 值在预期范围内）。
阴性对照： 无扩增曲线。
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