丙酮酸羧化酶(PC)测定试剂盒/微量法/96样

丙酮酸羧化酶(PC)测定试剂盒/微量法/96样

测定意义：

丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase ，PC ，EC 6.4.1.1)广泛存在于动物、霉菌和酵母的线粒体中，催化丙酮酸、ATP 、CO2 和水生成草酰乙酸、ADP 和 Pi，是糖异生过程的第一个限速酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。

测定原理：

PC 催化丙酮酸、ATP 、CO2 和水生成草酰乙酸、ADP 和 Pi，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和 NADH生成苹果酸和 NAD+ ，在 340nm 下测定 NADH 氧化速率，即可反映 PC 活性。

自备仪器和用品：

分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三转移到试剂一中混合溶解待用；置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 5 分钟；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂四的配制：在试剂四瓶中加入 1mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

2 、 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、10μL 试剂四和 180 μL 工作液，立即混匀，记录340nm 处初始吸光值 A1 和 2min 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A1-A2。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。