丙酮酸激酶(PK)测定试剂盒/分光光度法/48样 新品

丙酮酸激酶(PK)测定试剂盒/分光光度法/48样

测定意义：

PK（EC 2.7.1.40 ）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化糖酵解过程中的最后一步反应，是糖酵解过程中的主要限速酶之一，也是产生 ATP 的关键酶之一，因此测定 PK 活性具有重要意义。

测定原理：

PK 催化磷酸烯醇式丙酮酸和 ADP 生成 ATP 和丙酮酸，乳酸脱氢酶进一步催化 NADH 和丙酮酸生成乳酸和 NAD+ ，在 340nm 下测定 NADH 下降速率，即可反映 PK 活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

测定操作：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2 样本测定

(1）试剂二的配制：临用前取试剂二一瓶，加入 22.5mL 试剂一和 2.65mL 蒸馏水充分溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；现配现用。

(2）试剂三的配制：临用前取试剂三一支，加入 1.5mL 蒸馏水充分溶解待用；现配现用。

(3）在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 样本、50μL 试剂三和 900μL 试剂二，混匀，立即记录 340nm 处 20s时的吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A1-A2。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。