人疱疹病毒通用染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理:

基于SYBR Green染料法荧光定量PCR技术，利用一对特异性引物扩增人疱疹病毒保守基因序列。SYBR Green染料可非特异性结合双链DNA，在PCR扩增过程中荧光信号随产物积累而增强，通过实时监测荧光强度变化实现病毒DNA的定性检测。

试剂组成:

2×qPCR Master Mix：预混的SYBR Green染料、dNTPs、缓冲液（500μL×1管）

荧光PCR专用模板稀释液（1mL×1管）

人疱疹病毒通用引物混合物（100μL×1管）

阳性质控品（50μL×1管，含病毒DNA片段）

阴性质控品（250μL×1管，无模板对照）

使用说明书（1份）

实验步骤:

1. 样本核酸提取（样本处理区）

取100μL样本，使用离心柱法核酸提取试剂盒纯化DNA，洗脱体积50μL。

2. 试剂配制（试剂准备区）

根据样本数（N=样本数+1阴性质控+1阳性质控）配制反应体系，每管20μL：

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2×qPCR Master Mix 10μL

引物混合物 1μL

模板DNA 5μL

RNase-free水 4μL

3. PCR扩增（扩增区）

‌程序设置‌（以ABI 7500为例）：

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95℃ 3分钟（预变性）

95℃ 10秒 → 60℃ 1分钟（40循环，采集荧光信号）

4. 结果分析

‌基线设定‌：循环6-15；‌阈值‌：超过阴性质控曲线峰值。

‌判读标准‌：

阴性质控：Ct值≥40或无扩增曲线。

阳性质控：Ct值≤35且有S形扩增曲线。

样本：Ct值≤35且扩增曲线呈指数增长判为阳性。

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