ADPG焦磷酸化酶(AGP)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中,催化葡萄糖-1-磷酸与 ATP 反应生成淀粉合成的直接前体 ADPG ,是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。
测定原理:
AGP 催化的逆向反应生成 G1P,在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH ,340nm 下测定 NADPH 增加速率,即可计算 AGP 活性。
需自备的的仪器和用品:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。测定步骤:在 EP 管中按顺序加入下列试剂
试剂名称(μL)
测定管
试剂一
200
试剂二
320
样本
40
混匀,30℃保温 15 min ,置沸水浴中 1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴迅速冷却后,4000g4℃离心5min,取上清液,在 1mL 石英比色皿中依次加入下列试剂
上清液
400
425
试剂三
175
混匀后,立即于 340 nm波长下记录初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2 ,计算 ΔA=A2-A1。
注 意:
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
上海酶联生物科技有限公司
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